专利名称：人体基因组dna样本的制备封存方法及封存装置的利记博彩app
技术领域：
本发明涉及基因样本的制备与封存方法及所用的封存装置，特别是人体基因组样本的制备与封存方法及所用的封存装置。
背景技术：
人体基因组是指人体细胞内全部的遗传物质DNA。基因组DNA通过4种核苷酸的组合排列，蕴藏人体全部的遗传信息，经表达呈现人体全部的生命特征。保存人体基因组DNA样本即保存人体的全部生命信息。近代分子生物学技术的进步，已能在体外对基因组DNA的各种基因进行检测分析和克隆，用于疾病的基因诊断、个体识别、亲权鉴定、基因家谱的构建及遗传疾病的调查等。
目前，某些发达国家如美国、日本等已成立许多专业公司，面向普通人群，开展个人基因样本保存的服务，保存的基因组DNA可以长期维持其理化性质及生物学活性的稳定性。有的从商业角度出发，将某个人的基因组DNA封装在首饰上，随身佩带，作为一种具有特殊意义的纪念物。但到目前为止，国外开展基因样本保存服务的公司，为保持基因结构的完整性和性质的稳定性，都将分离获得的基因组DNA样本存贮在超低温条件下，费用甚为昂贵，个人难以实施。
发明内容
本发明要解决已有技术中人体基因组样本制备和保存所存在的实施条件苛刻、费用昂贵、个人难以实现的问题，为此而提供本发明的人体基因组DNA样本的制备封存方法及封存装置，本方法操作比较简单，费用省，所制样本保存简便且能在室温下长期保存；本发明所用封存装置，结构简明，实用性强，并具有长期保存、收藏的特殊价值与纪念意义。
为解决上述问题，本发明采用的技术方案其一是指人体基因组DNA样本的制备封存方法，其二是指用于封存所述DNA样本的封存装置。
本发明所述人体基因组DNA样本的制备封存方法，包括取人体组织细胞样品，此样品经细胞裂解和RNA水解后，去除水解液中的蛋白质，获取含DNA的溶液，其特殊之处是在所述含DNA的溶液中加入沉淀剂使DNA呈絮状沉淀的同时加入微孔玻璃颗粒并振摇，使沉淀的DNA吸附于微孔玻璃颗粒，经液-固分离后制得包含DNA的粒状样本，将所述的粒状样本装入玻璃安瓿并封口，再将装有所述粒状样本的封口的玻璃安瓿置入金属套筒，最后将所述的装置有玻璃安瓿的金属套筒嵌置于设有盲孔的透明封装体的所述的盲孔内。
所述将所述的粒状样本装入玻璃安瓿并封口可以是指将粒状样本装入玻璃安瓿经除氧、充氮后封口，如此更有利于长期保存。
所述的微孔玻璃颗粒可以是如下颗粒I、颗粒II或颗粒III之一种或数种，即微孔玻璃颗粒的直径为颗粒I 43微米～74微米，颗粒II 74微米～125微米，颗粒III 125微米～177微米，微孔玻璃颗粒的孔径为50纳米～100纳米。
使所述的样本得以去杂纯化，可将所述液-固分离后得到的包含DNA的粒状样本经洗涤后干燥。洗涤所用洗涤液可以是浓度70％(W/W)的乙醇-水溶液或丙酮，干燥可以是室温空气中自然干燥或低温真空干燥。
本发明所述的沉淀剂可以是异丙醇或无水乙醇。
本发明用于封存所述的DNA样本的封存装置，其特殊之处是设有透明封装体，透明封装体中设有盲孔，盲孔内嵌置有金属套筒，金属套筒内放置有用于封装所述DNA样本的玻璃安瓿。
所述的金属套筒可以由套体I和套体II相互套合而成—相互卡套或经螺纹配合而套合；于金属套筒内壁宜贴合有软质衬层，以防玻璃安瓿因碰撞而破碎；可以在金属套筒外壁镀设有镀金(黄金或白金)层；金属套筒外壁可以刻设有字符和/或图案体，包括本品名称和/或编号和/或本品生产厂名和/或有关徽标。
本发明中的金属套筒，最好采用含铅合金制成，这样能防辐射。
本发明中的透明封装体，采用水晶制成为合适，也可以由玻璃制成。
所述的透明封装体可以是一体的。
所述的透明封装体也可以是两体结合而成的，即由支座及其上所嵌置的嵌合体构成，所述的盲孔设于嵌合体。
在所述的透明封装体上可以刻印有基因保存人的姓名和/或照像和/或其他个性化铭文。
可以在所述的透明封装体上设有球缺状弧形凹陷位于盲孔开口部位，在球缺状弧形凹陷中可放置有具有装饰效果的球体—水晶球体或玻璃球体，此球体也可以设制成地球仪样式的。
透明封装体上的所述的盲孔可以不限于一个。
在微孔玻璃颗粒上吸附有DNA的本发明的人体基因组DNA样本，可用蒸馏水及TE缓冲液解析，得到溶有DNA的液体，该液体可直接用于基因分析。
本发明中的人体组织细胞样品为何种组织无所限定，可以是血液样品，也可以是口腔粘膜上皮细胞样品或毛发样品，还可以是其他样品。此样品作细胞裂解所用裂解液是本领域普通技术人员所能知晓的。细胞裂解后液体中含有DNA(脱氧核糖核酸)、RNA(核糖核酸)和蛋白质，经加入核糖核酸酶A溶液，使RNA水解溶于液体，再加入蛋白质沉淀剂(有内含醋酸铵的)使蛋白质沉淀后除去之。
RNA水解及除去蛋白质后的溶液含DNA，加入沉淀剂，如异丙醇、无水乙醇，使DNA呈絮状沉淀。
适用于本发明的所述的微孔玻璃颗粒，可采用浙江省杭州市绿得力化工有限公司生产和销售的微孔玻璃颗粒。
本发明由于在使DNA呈絮状沉淀的同时加入微孔玻璃颗粒，使DNA吸附于微孔玻璃颗粒，经液-固分离后制得包含DNA的粒状样本，故本发明制作简便，费用省，所制样本保存方便，并容易对样本作DNA分析。微孔玻璃颗粒主要成分为二氧化硅，具有极高的物理化学稳定性，不被酸、碱及有机溶剂溶解和改性；这种颗粒具有多孔网状结构，有很大的吸附界面，能高效吸附DNA。本发明由于将所述的包含DNA的粒状样本装入玻璃安瓿并封口，再将玻璃安瓿置入金属套筒，最后将金属套筒嵌置于透明封装体的盲孔内，故本发明的样本封存较为方便，且可在室温下长期保存，特别是玻璃安瓿除氧充氮后封口以及采用铅合金的套筒，对DNA的长期保存更为有利。本发明的封存装置，由透明封装体、金属套筒和玻璃安瓿组合而成，结构简明，对DNA样本保存效果好，并可以室温下长期保存；本封存装置可以有多种形状，使之具有特殊收藏价值与观赏意义；封装有人体基因组DNA样本的本发明的封存装置的保存，则更具有特殊纪念意义与收藏价值。
图1是封存有人体基因组DNA样本的一封存装置结构示意图；图2是图1装置俯视图；图3是本发明中的玻璃安瓿示意图；图4是本发明中的金属套筒示意图；图5是图4金属套筒局部放大示意图；图6是本发明中的一透明封装体结构示意图；图7是图6封装体俯视图；
图8是另一透明封装体结构示意图；图9是图8封装体俯视视图；图10是图8封装体右视图；图11是又一透明封装体结构示意图；图12是具有两个盲孔的一透明封装体结构示意图；图13是图11封装体俯视图；图14是图12封装体俯视图；图15是具棱状结构的一透明封装体结构示意图；图16具有两盲孔的又一透明封装体结构示意图；图17是图15封装体俯视图；图18是图16封装体俯视图。
图中标记为1透明封装体，11盲孔，12支座，13嵌合体，14球缺状弧形凹陷，2金属套筒，21套体I，22套体II，3软质衬层，4含DNA的粒状样本，5玻璃安瓿。
具体实施例方式
实施例1 用人体血液制备基因组DNA样本及其封存1、人体血液样品采集和保存以乙二胺四乙酸(EDTA)做抗凝剂，采集全血500μl。此血样在4℃可保存5天，如在-80℃冰冻保存，至少可维持2年而不变质。
2、裂解细胞于300μl全血中加入红细胞裂解液(内含氯化铵、乙二胺四乙酸、碳酸氢钠)900μl，使红细胞裂解。经离心沉淀，倾弃上清液，去除血红蛋白，得白细胞沉淀。在沉淀中加入细胞裂解液(内含三羟甲基氨基甲烷、乙二胺四乙酸、十二烷基硫酸钠)300μl，裂解白细胞。
3、核糖核酸酶处理在细胞裂解物中加入核糖核酸酶A溶液(4mg/ml)1.5μl，经混匀，37℃水浴保温，使核糖核酸(RNA)降解，溶解于反应液中。
4、沉淀蛋白质于上述反应液中加入蛋白质沉淀剂(内含醋酸铵)100μl，充分摇匀，使蛋白质沉淀，经离心，去除沉淀的蛋白质，留取含DNA的上清液。
5、沉淀并吸附DNA在含DNA的上清液中加入100％异丙醇(或冷冻无水乙醇)300μl，结果DNA呈絮状沉淀，同时加入微孔玻璃颗粒3mg，振摇，使沉淀的DNA吸附于微孔玻璃颗粒。再经离心，倾去上清液(内含RNA降解物及残留的蛋白质)，留取的沉淀即为包含DNA的粒状物(DNA紧密吸附于微孔玻璃颗粒)。此粒状物用冷冻的70％乙醇(或丙酮)500μl洗涤两次，以去除杂质。最后得到吸附有DNA的微孔玻璃颗粒，置于室温空气中自然干燥或低温真空干燥，目的物呈现白色干燥的细颗粒固型物，即为制得的人体基因组DNA纯化样本。
6、封存所制样本4在安瓿拉丝灌封机上去氧充氮，封装于玻璃安瓿5中；将封装有所述样本4的玻璃安瓿5放入外壁镀金、内壁贴合有软质衬层3的铅合金制成的由套体I 21和套体II 22相互套合的金属套筒2；将内置有玻璃安瓿5(其内装有含DNA的粒状样本4)的金属套筒2放置于水晶材料制成的透明封装体1的盲孔11。
透明封装体上的盲孔11可以是一个，也可以不限于一个。
实施例2 用人体口腔粘膜上皮细胞制备基因组DNA样本及其封存用无菌专用尼龙刷在口腔内壁刮擦数次，取出浸没于500μl细胞裂解液中，并不时搅动；同时加入蛋白酶K溶液(20mg/ml)1.5μl，混匀后于55℃水浴中保温过夜，使细胞充分裂解，释出DNA，后续操作与上例步骤3、4、5、6相同。
实施例3 用人体头发毛囊制备基因组DNA样本及其封存用清洁不锈钢镊子拔取头发3根，用蒸馏水清洗头发及根部毛囊的附着物，然后从头发根部剪取1cm，将发根毛囊部分浸入含有400μl细胞裂解液的离心管中，再加入蛋白酶K溶液2μl，56℃水浴保温过夜。次日离心去除毛发及其它杂质后，按例1步骤3、4、5、6程序操作。
实施例4 本发明一封存装置如图1所示，该封存装置具有一透明封装体1其上设有盲孔11，盲孔11内嵌置有金属套筒2，金属套筒2内放置有玻璃安瓿5，玻璃安瓿内可装入含人体基因组DNA的粒状样本4。金属套筒2由套体I 21和套体II 22相互套合构成(见图5)，其外壁具有镀金层，内壁贴合有软质衬层3，金属套筒2本体由铅合金制成，其外壁刻有可反映本品名称、编号、徽标的字符图案体。透明封装体1上刻印有基因保存人的姓名和/或照像和/或其他个性化铭文。
实施例5 另一封存装置本例封存装置，如图8、9、10所示，具有透明封装体1，该封装体具有支座12，其上嵌设有嵌合体13，嵌合体上开设有盲目孔11，其他构造与例4的相同。
图6、7的透明封装体，图11、13的透明封装体，图12、14的透明封装体，图15、17的透明封装体以及图16、18的透明封装体，分别可作为本发明中封存体的实施例中的透明封装体。
权利要求
1.人体基因组DNA样本的制备封存方法，包括取人体组织细胞样品，此样品经细胞裂解和RNA水解后，去除水解液中的蛋白质，获取含DNA的溶液，其特征是在所述含DNA的溶液中加入沉淀剂使DNA呈絮状沉淀的同时加入微孔玻璃颗粒并振摇，使沉淀的DNA吸附于微孔玻璃颗粒，经液-固分离后制得包含DNA的粒状样本，将所述的粒状样本装入玻璃安瓿并封口，再将装有所述粒状样本的封口的玻璃安瓿置入金属套筒，最后将所述的装置有玻璃安瓿的金属套筒嵌置于设有盲孔的透明封装体的所述的盲孔内。
2.如权利要求1所述的制备封存方法，其特征是将所述的粒状样本装入玻璃安瓿并封口是指将粒状样本装入玻璃安瓿经除氧、充氮后封口。
3.如权利要求1所述的制备封存方法，其特征是所述的微孔玻璃颗粒为如下颗粒I、颗粒II或颗粒III之一种或数种微孔玻璃颗粒的直径为颗粒I43微米～74微米，颗粒II74微米～125微米，颗粒III125微米～177微米，微孔玻璃颗粒的孔径为50纳米～100纳米。
4.如权利要求1、2或3所述的制备封存方法，其特征是所述液-固分离后得到的包含DNA的粒状样本经洗涤、干燥。
5.如权利要求4所述的制备封存方法，其特征是洗涤所用洗涤液为乙醇-水溶液或丙酮，干燥为室温空气中自然干燥或低温真空干燥。
6.如权利要求5所述的制备封存方法，其特征是所述的沉淀剂为异丙醇或无水乙醇。
7.用于封存如权利要求1所述的DNA样本的封存装置，其特征是设有透明封装体(1)，透明封装体(1)中设有盲孔(11)，盲孔(11)内嵌置有金属套筒(2)，金属套筒(2)内放置有用于封装所述DNA样本的玻璃安瓿(5)。
8.如权利要求7所述的封存装置，其特征是所述的金属套筒(2)由套体I(21)和套体II(22)相互套合而成，金属套筒(2)内壁贴合有软质衬层(3)，金属套筒(2)外壁镀覆有镀金层，金属套筒(2)外壁刻设有字符和/或图案体。
9.如权利要求7所述的封存装置，其特征是透明封装体(1)由支座(12)及其上所嵌置的嵌合体(13)构成，所述的盲孔(11)设于嵌合体(13)。
10.如权利要求7所述的封存装置，其特征是透明封装体(1)上设有球缺状弧形凹陷(14)位于盲孔(11)开口部位，在球缺状弧形凹陷(14)中放置有一球体。
全文摘要
操作方便，费用省的人体基因组DNA样本的制备封存方法，取人体组织细胞样品，经细胞裂解和RNA水解后去除水解液中的蛋白质，获取含DNA的溶液，在此溶液中加入沉淀剂使DNA呈絮状沉淀的同时加入微孔玻璃颗粒并振摇，使沉淀的DNA吸附于微孔玻璃颗粒，经液－固分离后制得包含DNA的粒状样本，将该粒状样本装入玻璃安瓿并封口，再将该玻璃安瓿置入金属套筒，最后将该金属套筒嵌置于透明封装体的盲孔内。结构简明的封存装置，设有透明封装体(1)，透明封装体(1)中设有盲孔(11)，盲孔(11)内嵌置有金属套筒(2)，金属套筒(2)内放置有用于封装所述DNA样本的玻璃安瓿(5)。本发明适用于人体基组DNA样本的制备、保存以用于基因分析。
文档编号C12Q1/68GK1537949SQ0311006
公开日2004年10月20日 申请日期2003年4月18日 优先权日2003年4月18日
发明者陈枢青, 厉朝龙, 陈亦胜 申请人:陈枢青, 陈亦胜, 厉朝龙