冬虫夏草菌寄主蝙蝠蛾幼虫的人工培养方法
【专利摘要】本发明属于昆虫类培养技术领域，涉及一种冬虫夏草菌寄主蝙蝠蛾幼虫的人工培养方法。包括以下步骤：A、采集高寒草甸地带的野生蝙蝠蛾的蛹，B、收集适量虫蛹采挖区域周边的高原腐殖土，C、将蛹放置在装有高原腐殖土的容器内，且蛹位于在土下2?3cm，并在容器四周围以纱网，在9?12℃下羽化，羽化成寄主蝙蝠蛾后，2?5d完成交配并产卵，D、取虫卵放置于腐殖土表层，放进恒温培养箱进行避光孵化，恒温培养箱温度为15℃，相对湿度为80?90％，孵化成幼虫，E、取饲养盒，放入饲养基质，将幼虫转移至饲养盒内，放入饲料，在10?15℃进行饲养。本发明提供了一种人工培育冬虫夏草菌寄主蝙蝠蛾幼虫的方法，存活率高。
【专利说明】
冬虫夏草菌寄主蝙蝠蛾幼虫的人工培养方法
技术领域
[0001] 本发明属于昆虫类人工培养技术领域，涉及一种冬虫夏草菌寄主蝙蝠蛾幼虫的人 工培养方法。
【背景技术】
[0002] 冬虫夏草是我国独有珍贵的特产，又称作虫草。因其医疗保健功效强大，故与鹿 茸、人参齐名，被列位于三大补品。研究初期，有人曾把冬虫夏草归于肉座目 (Hypocreeales)，但是根据近期的系统分类，冬虫夏草应归属于真菌界(Fungi)、子囊菌门 (Ascomycota)、子囊菌纲(Ascomycetes)、奠壳菌亚纲（Sordariomycetidae)、肉座菌目、麦 角菌科(Clavicipifaceae)、虫草属(Cordyceps)。所以，冬虫夏草是麦角菌科真菌冬虫夏草 菌寄生在蝙蝠科昆虫蝙幅蛾越冬幼虫上的子座及幼虫尸体的复合体。
[0003] 冬虫夏草是由于蝙蝠蛾幼虫被中国被毛孢菌侵染，幼虫体沦为营养寄主而形成 的。通常在初冬季节，蝙蝠蛾幼虫接触到中国被毛孢菌，便会被侵染。未僵死的幼虫逐渐蠕 动到近地表处，直至虫体营养消耗殆尽，幼虫死亡，此时整个虫体被中国被毛孢菌丝体充 满，形成僵虫。虫体僵死后，便进入了冬虫夏草的有性生长阶段，首先虫体头部会逐渐长出 子座原基，等到春末夏初，子座原基便开始发育，长出形状如草的子座，即虫草的繁殖器官。
[0004] 冬虫夏草对其生长环境条件的独特需求，致使其分布区域有局限性，仅分布于我 国云南、贵州、西藏、青海、四川西部及甘肃南部地区，通常生长于海拔为3000-5000m的高山 草甸中。由于其生长环境特殊、生长周期长等原因，目前还没有实现人工栽培。
[0005] 每年夏秋季，冬虫夏草菌开始在侵染幼虫的体内生长，数月后菌丝充满幼虫体腔， 入冬时形成僵虫，很快在土壤冻结前，从僵虫蜕裂线长出子座芽。到来年春夏，子座芽继续 生长，伸出地面。到6月中下旬，子座头部渐渐膨大，子座和子囊发育成熟。当年入秋后冬虫 夏草开始有性世代，在当年土壤冻结前从被侵染的寄主虫体头部长出短小的子座。在青海 玉树，9月下旬就已经可以挖到被寄生的虫体，头部的子座高约Icm且不露出土面，次年5月 化冻后，土壤温湿度适合子囊菌生长，子座以每天3-4_的速度长出地面，形似小草，子座出 土初为淡绿色，后变为紫红色，一般在露出地面部分达20-50mm时不再继续生长。到6月中 旬，子座头部渐渐肥大，7月下旬子囊孢子长成。8 - 9月逐渐成熟并从子囊壳散发出来，继续 对寄主幼虫进彳T寄生。
[0006] 1980年以来，科研人员不断地对冬虫夏草菌的分离培养和冬虫夏草的人工栽培进 行深入研究。研究人员先后分离、报道的与冬虫夏草有关的无性型菌种多达20多个学名， 2005年的中国菌物学会对冬虫夏草及其无性型进行了研讨。中国菌物学会理事长李玉教授 主持，中国科学院院士魏江春研究员作了冬虫夏草菌及其相关类群分子系统学分析的专题 报告。会议确认冬虫夏草菌的拉丁学名是Cordyceps sinensis，其无性型是中国被毛孢。国 际承认的无性型拉丁学名为Hirsrtella sinensis Liu，Guo，Yu et Zeng0
[0007] 虽然大量科学研究证明冬虫夏草的无性型是中国被毛孢，然而仍存在只要分离自 冬虫夏草的菌种即其无性型的认识。最常见的如蝙蝠蛾拟青霉Paecilomyces hepiali Chen et Dai,sp.Nov，目前已被广泛用于保健食品的生产。研究证明，它虽然分离自冬虫夏 草，但不是冬虫夏草的无性型。
[0008] 寄主蝙蝠蛾幼虫在人工饲养后期体重明显增加，活动范围扩大，取食和排泄明显 增多，栖居环境恶化，病虫害频发，尤其是病原性细菌和真菌引起的的病害，经常导致幼虫 大面积感染、死亡，虫口数量急剧下降，导致人工饲养后期幼虫存活率很低。在低海拔地区， 目前仍然没有一种能在长期人工饲养蝙蝠蛾幼虫减少病害，提高幼虫成活率的有效方法。 故寻找一种既可以满足病害防治又能持续给幼虫生长提供所需营养物质的幼虫饲养基质 十分必要。
【发明内容】
[0009] 本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一种冬虫夏草菌寄主蝙蝠蛾幼虫的人 工培养方法。
[0010] 为达到上述目的，本发明采用了下列技术方案:一种冬虫夏草菌寄主蝙蝠蛾幼虫 的人工培养方法，包括以下步骤：
[0011] A、采蛹，采集高寒草甸地带的野生蝙蝠蛾的蛹，保存，
[0012] B、采集饲养基质，收集适量虫蛹采挖区域周边的高原腐殖土，
[0013] C、羽化、交配，将蛹放置在装有高原腐殖土的容器内，且蛹位于在土下2-3cm，并在 容器四周围以纱网，在9-12Γ下羽化，羽化成寄主蝙蝠蛾后，2-5d完成交配并产卵，
[0014] D、孵化，取虫卵放置于腐殖土表层，放进恒温培养箱进行避光孵化，恒温培养箱温 度为15°C，相对湿度为80-90%，孵化成幼虫，
[0015] E、饲养，取饲养盒，放入饲养基质，将幼虫转移至饲养盒内，放入饲料，在10-15°C 进行饲养。
[0016] 在上述的冬虫夏草菌寄主蝙蝠蛾幼虫的人工培养方法中，在步骤B中，收集虫蛹时 还采挖虫蛹附近的野生珠芽寥。
[0017] 在上述的冬虫夏草菌寄主蝙蝠蛾幼虫的人工培养方法中，在步骤C中，寄主蝙蝠蛾 产卵后虫卵立即在相对湿度为80%的环境下保存。
[0018] 在上述的冬虫夏草菌寄主蝙蝠蛾幼虫的人工培养方法中，在步骤E中，所述的饲养 基质为按重量比6:4混合后的高原腐殖土和沙子，饲养基质厚度为10cm，
[0019] 在上述的冬虫夏草菌寄主蝙蝠蛾幼虫的人工培养方法中，在步骤E中，所述的饲料 为珠芽寥和/或胡萝卜。
[0020] 在上述的冬虫夏草菌寄主蝙蝠蛾幼虫的人工培养方法中，在步骤E中，所述的饲养 基质为重量比为5: 2:6的清水沙、木肩和高原腐殖土的混合物，饲养基质的含水量为55-65%〇
[0021] 在上述的冬虫夏草菌寄主蝙蝠蛾幼虫的人工培养方法中，在混合前，高原腐殖土 60 °C烘烤4h以上，清水沙180 °C烘烤2h以上，木肩经121°C高压蒸汽灭菌30min以上，
[0022] 在上述的冬虫夏草菌寄主蝙蝠蛾幼虫的人工培养方法中，所述的饲养基质内接入 金针菇固体母种并与饲养基质搅拌均匀，在相对湿度为65-75%，温度为20-23°C的培养室 内培养10-14d。
[0023] 在上述的冬虫夏草菌寄主蝙蝠蛾幼虫的人工培养方法中，所述的饲养基质中加入 l-2mm厚的环形胡萝卜片作为饲料，饲养时间为60天，饲养期间不更换饲料。
[0024] 在上述的冬虫夏草菌寄主蝙蝠蛾幼虫的人工培养方法中，所述的饲养基质中加入 切成5-lOcm长的珠芽廖根茎，饲养时间为60天，饲养期间不更换饲料。
[0025] 与现有的技术相比，本发明的优点在于:提供了一种人工培育冬虫夏草菌寄主蝙 蝠蛾幼虫的方法，存活率高。
【具体实施方式】
[0026] 下述实施例中所用的试剂，如无特殊说明，可以从常规生化试剂商店购买得到。以 下实施例中的定量数据，均设置三次重复实验，结果取平均值。
[0027] 实施例1
[0028] -种冬虫夏草菌寄主蝙蝠蛾幼虫的人工培养方法，包括以下步骤：
[0029] A、采蛹，采集高寒草甸地带的野生蝙蝠蛾的蛹，保存，
[0030] B、采集饲养基质，收集适量虫蛹采挖区域周边的高原腐殖土，
[0031] C、羽化、交配，将蛹放置在装有高原腐殖土的容器内，且蛹位于在土下2-3cm，并在 容器四周围以纱网，在9-12Γ下羽化，羽化成寄主蝙蝠蛾后，2-5d完成交配并产卵，寄主蝙 蝠蛾产卵后虫卵立即在相对湿度为80%的环境下保存。
[0032] D、孵化，取虫卵放置于腐殖土表层，放进恒温培养箱进行避光孵化，恒温培养箱温 度为15°C，相对湿度为80-90%，孵化成幼虫，
[0033] E、饲养，取饲养盒，放入饲养基质，将幼虫转移至饲养盒内，放入饲料，在10-15°C 进行饲养。饲养基质为按重量比6:4混合后的高原腐殖土和沙子，饲养基质厚度为10cm，饲 料为珠芽寥和/或胡萝卜。
[0034] 实施例2
[0035]本实施例与实施例1基本相同，不同之处在于，在步骤B中，收集虫蛹时还采挖虫蛹 附近的野生珠芽寥。
[0036]在步骤E中，所述的饲养基质按沙子:木肩：高原腐殖土以重量比1:2:2均匀混合， 边混边添加无菌水，调节培养基的水分含量为55 % -65 %。接入金针菇固体母种，充分搅拌 均匀。控制培养室相对湿度在70 %左右，温度控制在20-23 °C左右，培养IO-Hd。在混合前， 高原腐殖土 60 °C烘烤4h以上，清水沙180 °C烘烤2h以上，木肩经121°C高压蒸汽灭菌30min以 上。
[0037] 实施例3
[0038] 本实施例与实施例1基本相同，不同之处在于，在步骤E中，所述的饲养基质为重量 比为5: 2: 6的清水沙、木肩和高原腐殖土的混合物，饲养基质的含水量为55-65%。在混合 前，高原腐殖土60 °C烘烤4h以上，清水沙180 °C烘烤2h以上，木肩经121 °C高压蒸汽灭菌 30min以上。
[0039] 实施例4
[0040] 本实施例与实施例3基本相同，不同之处在于，饲养基质内接入金针菇固体母种并 与饲养基质搅拌均匀，在相对湿度为70%，温度为20-23°C的培养室内培养IO-HcL饲养基 质中加入l-2mm厚的环形胡萝卜片作为饲料，饲养时间为60天，饲养期间不更换饲料。
[0041 ] 实施例5
[0042] 本实施例与实施例4基本相同，不同之处在于，在步骤E中，饲养基质中加入切成δ-?Οαη 长的珠芽廖根茎，饲养时间为 60 天，饲养期间不更换饲料。
[0043] 对比例6
[0044] 本实施例与实施例4基本相同，不同之处在于，饲养时间为60天，每过20d更换一次 饲料。
[0045] 对比例7
[0046] 本实施例与实施例5基本相同，不同之处在于，饲养时间为60天，每过20d更换一次 饲料。
[0047] 对比例8
[0048]本实施例在实施例2的基础上，将金针菇固体母种在121°C高压蒸汽灭菌30min后 与饲养基质搅拌均匀。
[0049] 从同一批孵化的蝙蝠蛾幼虫收集400条4龄以上幼虫，逐条称重，计算平均体重。将 幼虫平均放入实施例1-8的8个饲养盒内。保持环境湿度65%-85%。初期保持房间温度18 °C，5d后，温度调为HTC，饲养1个月后统计分析幼虫存活率和体重变化率有无显著差异。结 果见下表：
[0050] 幼虫存活率和体重变化率
[0052]实施例1、3和8的饲养基质中均不含具有活性的金针菇菌种。实施例2、4、5、6和7中 含有具有活性的金针菇菌种。实施例3和4的饲养基质相同，但实施例3中不含具有活性的金 针菇菌种。实施例1的饲养基质中不含木肩。
[0053] 由上表可知，含有木肩的饲养基质及含有活性金针燕菌种的实施例4和5的幼虫成 活率最高，体重标化率最快。实施例8由于经过高温灭菌，饲养基质中的活性微生物含量极 低，故而蝙蝠蛾幼虫在其条件下的平均存活率远低于其他实施例。是实施例4和5含有沙子 和木肩，沙子增加了基质的透气性和疏松度，既促进了金针菇菌种的生长，抑制了基质中的 有害微生物的繁殖，又能满足蝙蝠蛾幼虫喜欢打隧道活动的特性，所以提高了幼虫的成活 率。比较试验结果可知，实施例4和5对于蝙蝠蛾生长的辅助优势更胜于其他实施例，即含活 性金针菇菌种的人工制备的基质在人工饲养幼虫过程中更符合幼虫的要求，在为幼虫生长 提供所需营养的同时，又有防治病害的作用。
[0054] 实施例4和5,实施例6和7的体重变化比较一致，分析原因，由于只是饲料不同，其 他条件基本一致，实施例4和6使用人工种植的胡萝卜为饲料，实施例5和7使用虫冬虫夏草产 区采挖的野生珠芽廖。由此可见，在人工饲养条件下，完全可以用低海拔地区的饲料替代野 生饲料，替代饲料资源丰富，成本低，且能满足幼虫的生长发育所需的营养物质。实施例4和 6,实施例5和7的死亡率不一致，是因为中间两次更换饲料时造成了幼虫惊扰，导致实施例6 和7的幼虫死亡率增加。
[0055] 本发明得出的蝙蝠蛾幼虫最佳饲养基质条件为:①沙子:木肩：高原腐殖土 = 5:2: 6;②水分含量为55 %-65 % ;③接入金针菇固体母种;④控制培养室相对湿度在70 %左右； ⑤温度控制在20_23°C左右，培养IO-Hd备用。
[0056] 金针菇是一种常见的低温型食用菌，属于腐生菌，无光合作用能力，其生命活动所 需的营养物质就只能由菌丝体从腐生基质中获得。菌丝生长时不需要光照，并且在完全黑 暗的条件下，菌丝仍能正常生长。金针菇为喜湿的菇类，耐旱能力强，菌丝体在含水量55-65 %的培养基中生长良好。金针菇菌丝在5-30°C的范围内均可生长，6°C以上时生长速度随 温度的升高而逐渐加快，菌丝生长最适温度为20_25°C。金针菇菌丝在PH值为3-8的范围内 均可生长，菌丝生长的适宜PH值为4-7,且PH值为6时菌丝生长速度最快。这些条件与蝙蝠蛾 幼虫所需生长条件基本一致。蝙蝠蛾幼虫的食物残渣和粪便可以为金针菇菌丝生长提供所 需营养，因此本发明选择金针菇作为微生物拮抗剂。
[0057] 本文中所描述的具体实施例仅仅是对本发明精神作举例说明。本发明所属技术领 域的技术人员可以对所描述的具体实施例做各种各样的修改或补充或采用类似的方式替 代，但并不会偏离本发明的精神或者超越所附权利要求书所定义的范围。
【主权项】
1. 一种冬虫夏草菌寄主蝙蝠蛾幼虫的人工培养方法，其特征在于，包括以下步骤： A、 采蛹，采集高寒草甸地带的野生蝙蝠蛾的蛹，保存， B、 采集饲养基质，收集适量虫蛹采挖区域周边的高原腐殖土， C、 羽化、交配，将蛹放置在装有高原腐殖土的容器内，且蛹位于在土下2-3cm，并在容器 四周围以纱网，在9-12Γ下羽化，羽化成寄主蝙蝠蛾后，2-5d完成交配并产卵， D、 孵化，取虫卵放置于腐殖土表层，放进恒温培养箱进行避光孵化，恒温培养箱温度为 15°C，相对湿度为80-90%，孵化成幼虫， E、 饲养，取饲养盒，放入饲养基质，将幼虫转移至饲养盒内，放入饲料，在10-15 °C进行 饲养。2. 根据权利要求1所述的冬虫夏草菌寄主蝙蝠蛾幼虫的人工培养方法，其特征在于，在 步骤B中，收集虫蛹时还采挖虫蛹附近的野生珠芽寥。3. 根据权利要求1所述的冬虫夏草菌寄主蝙蝠蛾幼虫的人工培养方法，其特征在于，在 步骤C中，寄主蝙蝠蛾产卵后虫卵立即在相对湿度为80%的环境下保存。4. 根据权利要求1所述的冬虫夏草菌寄主蝙蝠蛾幼虫的人工培养方法，其特征在于，在 步骤E中，所述的饲养基质为按重量比6:4混合后的高原腐殖土和沙子，饲养基质厚度为 IOcm05. 根据权利要求1所述的冬虫夏草菌寄主蝙蝠蛾幼虫的人工培养方法，其特征在于，在 步骤E中，所述的饲料为珠芽寥和/或胡萝卜。6. 根据权利要求1所述的冬虫夏草菌寄主蝙蝠蛾幼虫的人工培养方法，其特征在于，在 步骤E中，所述的饲养基质为重量比为5:2:6的清水沙、木肩和高原腐殖土的混合物，饲养基 质的含水量为55-65%。7. 根据权利要求6所述的冬虫夏草菌寄主蝙蝠蛾幼虫的人工培养方法，其特征在于，在 混合前，高原腐殖土 60°C烘烤4h以上，清水沙180°C烘烤2h以上，木肩经121°C高压蒸汽灭菌 30min以上。8. 根据权利要求7所述的冬虫夏草菌寄主蝙蝠蛾幼虫的人工培养方法，其特征在于，所 述的饲养基质内接入金针菇固体母种并与饲养基质搅拌均匀，在相对湿度为65-75%，温度 为20-23°C的培养室内培养10-14d。9. 根据权利要求8所述的冬虫夏草菌寄主蝙蝠蛾幼虫的人工培养方法，其特征在于，所 述的饲养基质中加入l_2mm厚的环形胡萝卜片作为饲料，饲养时间为60天，饲养期间不更换 饲料。10. 根据权利要求8所述的冬虫夏草菌寄主蝙蝠蛾幼虫的人工培养方法，其特征在于， 所述的饲养基质中加入切成5-lOcm长的珠芽廖根茎，饲养时间为60天，饲养期间不更换饲 料。
【文档编号】A01K67/033GK105941340SQ201610353635
【公开日】2016年9月21日
【申请日】2016年5月25日
【发明人】林海萍, 朱旭伟, 郭恺, 周湘, 苏秀, 李朋举
【申请人】浙江农林大学