牛樟树组织培养快速繁殖的方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种牛精树组织培养繁殖的方法。
【背景技术】
[0002] 牛精（Cinnamomumkanehirae化y)属精科(Xauraceae)精属植物，又名黑精，为 台湾特有常绿阔叶大乔木，树干通直，树体高耸及初生叶颜色多变，深具观赏价值，是极具 发展潜力的景观树种。因其具有特殊的香味，且不易腐朽，材质细致，纹理交错，牛精一直是 雕刻神像的最佳素材。牛精树叶中含有独特的Ξ祗类，对治疗癌症有显著功效。牛精备受 关注的另一个主要原因在于极具商业价值的珍贵药用真菌-牛精芝仅寄生于牛精树树干。
[0003] 目前牛精天然林因过度开发W及人为盗伐已溯临灭绝危机，常常一木难求。此外， 牛精树体高大，种子采集困难，加上种子的发芽率低，人工繁育困难较大。因此，建立方法简 单、生根率高的牛精树组织培养快速繁殖体系，将对牛精的开发利用起到重要作用。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种种苗健壮，成活率高，满足市场对牛精树的种苗的大 量需求，有效解决牛精树规模化育苗问题的牛精树组织培养快速繁殖的方法。
[0005] 本发明的技术解决方案是：
[0006] 一种牛精树组织培养快速繁殖的方法，其特征是：包括下列步骤：
[0007] (1)外植体的采集和消毒：
[0008] 取带蔽芽的茎段作为外植体，用质量百分数0. 05%的洗洁精浸泡5min，自来水冲 洗后，移置于超净工作台上；在75%乙醇中浸泡30秒，无菌水冲洗2遍后，用0. 1 %升隶消 毒lOmin，无菌水清洗3次后，再用无菌吸收纸去掉表面水分，切成0.8-lcm带一个蔽芽的茎 段；
[0009] (2)无菌试管苗的获得：
[0010] 将上述消毒过的外植体接种于芽分化培养基上30天诱导不定芽萌发，得到无菌 试管苗；培养溫度为26-28°C，光照强度为15001UX，光照周期：光/暗为12h/12h;分化培养 基WWPM为基本培养基，添加植物激素包括：6-苄基腺嚷岭2. 〇111邑/1、吗|噪下酸0. 1111邑/1、激 动素0. 2mg/L，薦糖和琼脂浓度分别是20g/L和6. 5g/L;培养基抑值为5.8;
[0011] (3)试管苗繁殖培养：
[0012] 将步骤（2)得到的无菌试管苗置于增殖培养基上得到大量不定芽；培养溫度为 26-28°C，光照强度为15001UX，光照周期：光/暗为12h/12h;增殖培养基是WWPM为基本培 养基，添加聚乙締化咯烧酬500mg/l、活性炭Ig/LW及植物激素6-苄基腺嚷岭2. 5mg/lJ3| 噪下酸0. 3mg/l、灵发素0.Img/l，薦糖和琼脂浓度分别是20g/L和6. 5g/L;培养基抑值为 5. 8 ;
[0013] (4)试管苗的生根培养：
[0014] 将步骤（3)得到的不定芽，置于生根培养基中诱导生根；培养溫度为26-28°C，光 照强度为15001UX，光照周期：光/暗为12h/12h;增殖培养基是WWPM为基本培养基，添 加聚乙締化咯烧酬0. 5g/L、活性炭1.Og/LW及植物激素：吗I噪下酸0. 5-1.Omg/l、糞乙酸 0. 5mg/L、灵发素0.Img/L;薦糖和琼脂浓度分别是20g/L和6. 5g/L;培养基抑值为5.8; [001引巧）炼苗移栽：
[0016] 将步骤（4)获得的带根的3cm高试管苗炼苗5-7山用綴子取出试管苗，洗净根部的 培养基，移栽置灭菌后的质量比：赔石：泥炭上为1:1的基质中生长2个月后，再移栽大棚 进行管理。
[0017] 所述WPM为木本植物用培养基，
[001引 配方：
[0019]
[0020]
[0021] 本发明得到的种苗健壮，成活率达到99. 2%，满足市场对牛精树的种苗的大量需 求，有效解决牛精树规模化育苗问题。
[0022] 下面结合实施例对本发明作进一步说明。
【具体实施方式】
[0023] -种牛精树组织培养快速繁殖的方法，包括下列步骤：
[0024] (1)外植体的采集和消毒：
[00巧]取带蔽芽的茎段作为外植体，用质量百分数0. 05%的洗洁精浸泡5min，自来水冲 洗后，移置于超净工作台上。在75%乙醇中浸泡30秒，无菌水冲洗2遍后，用0. 1 %升隶消 毒lOmin，无菌水清洗3次后，再用无菌吸收纸去掉表面水分，切成0.8-lcm带一个蔽芽的茎 段。
[0026] (2)无菌试管苗的获得：
[0027] 将上述消毒过的外植体接种于芽分化培养基上30天诱导不定芽萌发，得到无菌 试管苗。培养溫度为26-28°C，光照强度为15001UX，光照周期为12h/12h(光/暗）。分化 培养基WWPM为基本培养基，添加植物激素包括：6-苄基腺嚷岭化-BA) 2. 〇111邑/1、吗|噪下酸 (IBA)O.Img/L、激动素化Τ)0. 2mg/L。薦糖和琼脂浓度分别是20g/L和6. 5g/L。培养基抑 值为5.8。
[0028] (3)试管苗繁殖培养：
[0029] 将步骤（2)得到的无菌试管苗置于增殖培养基上得到大量不定芽。培养溫度为 26-28°C，光照强度为15001UX，光照周期为12h/12h(光/暗）。增殖培养基是WWPM为基 本培养基，添加聚乙締化咯烧酬（PVP)500mg/L、活性炭Ig/LW及植物激素6-苄基腺嚷岭 化-BA)2. 5111邑/1、吗|噪下酸（IBA)O. 3mg/L、灵发素（LF巧0.Img/L。薦糖和琼脂浓度分别是 20g/L和6. 5g/L。培养基抑值为5.8。
[0030] (4)试管苗的生根培养：
[003。 将步骤做得到的不定芽，置于生根培养基中诱导生根。培养溫度为26-28。光 照强度为15001UX，光照周期为12h/12h(光/暗）。增殖培养基是WWPM为基本培养基，添 加聚乙締化咯烧酬（PVP)O. 5g/l、活性炭1.Og/LW及植物激素：吗I噪下酸（IBA)O. 5-1.Omg/ L糞乙酸（NAA)O. 5mg/l、灵发素（LF巧0.Img/L。薦糖和琼脂浓度分别是20g/L和6. 5g/L。 培养基抑值为5.8。
[003引 妨炼苗移栽：
[0033] 将步骤（4)获得的带根的长势良好的试管苗（约3cm高）炼苗5-7山用綴子取出 试管苗，洗净根部的培养基，移栽置灭菌后的赔石：泥炭±为1:1的基质中生长2个月后，再 移栽大棚进行管理。
[0034] 所述WPM为木本植物用培养基，
[0035] 配方：
[0036]
[0037]
[003引得到的种苗健壮，成活率达到99. 2%。
【主权项】
1. 一种牛樟树组织培养快速繁殖的方法，其特征是：包括下列步骤： (1) 外植体的采集和消毒： 取带腋芽的茎段作为外植体，用质量百分数0. 05%的洗洁精浸泡5min，自来水冲洗 后，移置于超净工作台上；在75 %乙醇中浸泡30秒，无菌水冲洗2遍后，用0. 1 %升汞消毒 lOmin，无菌水清洗3次后，再用无菌吸收纸去掉表面水分，切成0. 8-lcm带一个腋芽的茎 段； (2) 无菌试管苗的获得： 将上述消毒过的外植体接种于芽分化培养基上30天诱导不定芽萌发，得到无菌试管 苗；培养温度为26-28°C，光照强度为15001UX，光照周期：光/暗为12h/12h ;分化培养基以 WPM为基本培养基，添加植物激素包括：6_苄基腺嘌呤2. Omg/L、吲哚丁酸0. lmg/L、激动素 0. 2mg/L，蔗糖和琼脂浓度分别是20g/L和6. 5g/L ;培养基pH值为5. 8 ; (3) 试管苗繁殖培养： 将步骤⑵得到的无菌试管苗置于增殖培养基上得到大量不定芽；培养温度为 26-28°C，光照强度为15001UX，光照周期：光/暗为12h/12h ;增殖培养基是以WPM为基本培 养基，添加聚乙烯吡咯烷酮500mg/L、活性炭lg/L以及植物激素6-苄基腺嘌呤2. 5mg/L、吲 哚丁酸〇. 3mg/L、灵发素0. lmg/L，蔗糖和琼脂浓度分别是20g/L和6. 5g/L ;培养基pH值为 5. 8 ； (4) 试管苗的生根培养： 将步骤（3)得到的不定芽，置于生根培养基中诱导生根；培养温度为26-28Γ，光照强 度为15001UX，光照周期：光/暗为12h/12h ;增殖培养基是以WPM为基本培养基，添加聚乙 烯吡咯烷酮〇. 5g/L、活性炭1.0 g/L以及植物激素：吲哚丁酸0. 5-1. Omg/L、萘乙酸0. 5mg/ U灵发素0. lmg/L ;蔗糖和琼脂浓度分别是20g/L和6. 5g/L ;培养基pH值为5. 8 ; (5) 炼苗移栽： 将步骤（4)获得的带根的3cm高试管苗炼苗5-7d，用镊子取出试管苗，洗净根部的培养 基，移栽置灭菌后的质量比：蛭石：泥炭土为1:1的基质中生长2个月后，再移栽大棚进行 管理。2. 根据权利要求1所述的牛樟树组织培养快速繁殖的方法，其特征是：所述WPM为木 本植物用培养基， 配方：
【专利摘要】本发明公开了一种牛樟树组织培养快速繁殖的方法，包括外植体的采集和消毒、无菌试管苗的获得、试管苗繁殖培养、试管苗的生根培养、炼苗移栽等步骤。本发明得到的种苗健壮，成活率达到99.2%，满足市场对牛樟树的种苗的大量需求，有效解决牛樟树规模化育苗问题。
【IPC分类】A01H4/00
【公开号】CN105409779
【申请号】CN201510990381
【发明人】王磊, 王仲礼, 宿红艳
【申请人】鲁东大学
【公开日】2016年3月23日
【申请日】2015年12月25日