地皮消的繁殖方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及中草药繁殖技术，尤其涉及一种地皮消的繁殖方法。
【背景技术】
[0002] 地皮消 Pararuellia delavayana 为爵床科（Acanthaceae)地皮消属 (Pararuellia)多年生草本，别名地皮胶、刀口药、蛆药，是我国特有药用植物，产四川南部、 云南中北部及贵州，生于海拔750-3000m的山地草坡、疏林下。地皮消全草入药具有清热解 毒、散瘀消肿、拔毒生肌、散瘀生新、杀虫等功效，主治肺炎、扁桃体炎、腮腺炎、瘰疬、脓肿疮 毒、骨折等。在云南寻甸、石林、弥勒等原生地，当地人称地皮消为"小奇药"，用于感冒发热、 跌打损伤、腰膝酸痛等。水煎服用于感冒发热；用白酒浸泡成为药酒温热外擦治跌打损伤； 治腰膝酸痛，则直接服用药酒。
[0003] 地皮消通常以种子为繁殖单位，但其种子萌发率低，种子苗生长缓慢、后代变异 大，并受到萌发季节的限制，难以进行规模化、标准化（基因型背景一致）种植和高药效品 种的大面积推广。因此，需要寻求一种新的成本低、时间短、质量和成活率高，且能将优良性 状固定下来的无性繁殖方法来扩大地皮消种苗的繁殖量，进行地皮消高品质种苗的工厂化 生产，以满足种植需求。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于解决地皮消现有繁殖技术存在的缺陷，提供一种能够在短时间 内获得质优量大的地皮消无性种苗方法，该方法为保护地皮消野生资源和发展人工种植奠 定技术基础，同时可将优良性状予以固定，提供基因型背景一致的优质种苗以满足人工种 植的需求。
[0005] -种地皮消的繁殖方法，包括将消毒灭菌处理后地皮消外植体先后接种于不同的 培养基中进行愈伤组织诱导、丛芽发生和增殖同步培养步骤。
[0006] 进一步地，如上所述的地皮消的繁殖方法，所述愈伤组织诱导的步骤包括：
[0007] 步骤1 :将消毒灭菌处理后地皮消外植体接种于培养基A中：
[0008] MS培养液 6-苄胺基嘌呤 6-BA 1 0-1.5 mg/L 萘乙酸 NAA 0.1-1.0 mg/L 激动素 KT 0.05-0.2mg/L 蔗糖 30000 mg/L 琼脂粉 48000 mg/L pH 5.4-5.8
[0009] 培养条件：在光照度1500-20001x，光照时间12h/d，温度控制在22± 1°C的条件下 进行愈伤组织诱导，培养20d后出现质地紧密的愈伤组织，继续培养20d后愈伤组织分化出 大量致密丛生芽，此时将丛生芽切割为3-5株一丛，转接至相同的新培养基A中继续培养 20d，丛生芽繁殖生长为增殖芽；
[0010] 其中，所述外植体为生长健壮的野生植株带芽茎段，按I. 5-2. Ocm长度切取。
[0011] 进一步地，如上所述的地皮消的繁殖方法，所述丛芽发生和增殖同步培养包括以 下步骤：
[0012] 步骤2 :将步骤1培养的增殖芽切割为3-5株一丛，转接至培养基B中：
[0013] B5培养液 6-苄胺基噤呤 6-BA 1.0-1.5 mg/L 萘乙酸N A A 0.1-1.0mg/L 激动素 KT 0.05-0.2mg/L 鹿糖 20000 mg/L 琼脂粉 48000 mg/L pH 5.4-5.8
[0014] 培养条件：在光照度1500-20001X，光照时间12h/d，温度控制在22± 1°C的条件下 继续培养40d ;
[0015] 步骤3 :将步骤2培养的增殖芽按40d的生长周期轮流接入培养基A和培养基B中 进行增殖，直到丛芽高3-4cm ;
[0016] 步骤4 :取步骤3丛芽中高3-4cm的健壮主苗接种于培养基C中：
[0017] MS培养液 萘乙酸 NAA 0.1-1.0 mg/L 蔗糖 30000 mg/L 琼脂粉 48000 mg/L pH 5.4-5.8
[0018] 培养条件：在光照度1500-20001x，光照时间12h/d，温度控制在22±1°C的条件 下，培养45d获得苗壮根粗的生根苗；
[0019] 步骤5 :取步骤4中6-8cm高的生根苗置于室温下炼苗3d后，从培养基中取出幼 苗，将残留培养基清洗干净，放入质量浓度0. 1-0. 2%的多菌灵溶液中消毒2-3min，后移栽 至消毒后的腐殖质中保温保湿培养，生长30d后，即得移栽苗。
[0020] 进一步地，如上所述的地皮消的繁殖方法，步骤1中所述消毒灭菌处理的方法为： 先用自来水清洗表面的泥土和灰尘，再放到流水下冲洗2h后，置于超净工作台上用体积比 为75%的酒精消毒60s，再用质量百分比为0. 1 %的HgCl2灭菌6min，最后用无菌水冲洗若 干次后放在无菌滤纸上吸干表面水分，最终得到消毒灭菌处理的外植体。
[0021] 本发明提供的地皮消的繁殖方法具有以下有益效果：
[0022] 1、用组织培养技术在培养室内好可实现周年生产，既节约了土地资源，又提高了 经济效益，克服了传统繁殖方式无法周年进行生产的难点。
[0023] 2、实现了高效快繁的目的，40-55d为一个培养周期，繁殖系数可达15.0以上。
[0024] 3、解决了地皮消属植物快速繁殖中易出现的玻璃化现象，提高了种苗质量。
[0025] 4、解决了传统种子繁殖后代分离大、性状不稳定而导致的种苗品质不一的难题， 通过本发明，可使所有种苗保持同一基因型背景，易于标准化、工厂化操作，有效地提高了 种苗质量，可为大面积推广种植提供统一标准的优良种苗。
[0026] 5、对地皮消快速繁殖体系进行了优化，在同一培养基中，可同时进行愈伤组织诱 导、丛芽发生和增殖培养，简化了培养程序；整个快速繁殖过程只需3种培养基就解决了从 愈伤组织、丛芽发生和增殖、克服玻璃化现象以及生根问题，利于安排生产计划。
【具体实施方式】
[0027] 为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面本发明中的技术方案进行清 楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于 本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他 实施例，都属于本发明保护的范围。
[0028] 实施例
[0029] 1、外植体的获取：选择生长势好、无病虫害、无畸形的健壮植株，取其茎尖下第 3-5节茎段，用手术刀切割为约2-3cm长。
[0030] 2、将1步骤的带芽茎段先用自来水