一种萼花臂尾轮虫室内高密度培养休眠卵的分离纯化方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种培养轮虫休眠卵的分离纯化方法，具体地说，涉及一种萼花臂尾 轮虫室内高密度培养休眠卵的分离纯化方法。
【背景技术】
[0002] 萼花臂尾轮虫，学名BrachionuscalyciflorusPallas，俗名轮虫、灰水，是轮虫 动物门、单巢纲、游泳目、臂尾轮虫科、臂尾轮虫属的1种淡水种。萼花臂尾轮虫是水产苗种 开食和早期培育阶段的优良饵料，在水生动物苗种生产中需求量非常大。传统轮虫养殖采 用土池养殖，近年来为适应现代育苗的需求，室内高密度养殖开始盛行。萼花臂尾轮虫在室 内高密度培养末期，进入有性生殖，会产生大量休眠卵，休眠卵密度较大会沉入培养容器底 部。这种卵可以耐受干燥、高温、冰冻及水质的剧烈变化，萼花臂尾轮虫主要依靠休眠卵越 冬，因此可用冬卵的形式保种并储备数量充足的原种。在高密度培养模式下，如何将休眠卵 进一步与残渣（藻类、轮虫）分离，便于后续形成商品，利于包装处理是轮虫休眠卵工业化 生产的核心问题，但是该技术一直尚未突破。本发明针对该问题，以萼花臂尾轮虫为研宄对 象摸索出了一套分离纯化办法，既能达到快速分离的目的，又不会对其萌发率造成影响，为 大规模商品化生产休眠卵种子提供生产技术。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的在于克服上述技术存在的缺陷，提供一种萼花臂尾轮虫室内高密度 培养休眠卵的分离纯化方法，该方法以萼花臂尾轮虫为研宄对象摸索出了一套分离纯化办 法，既能达到快速分离的目的，又不会对其萌发率造成影响，以期为后续大规模商品化生产 提供借鉴。
[0004] 其具体技术方案为：
[0005] 一种萼花臂尾轮虫室内高密度培养休眠卵的分离纯化方法，包括以下步骤：
[0006] 步骤1 :利用塑料软管虹吸浓缩培养液，收集容器底部含休眠卵的残渣；
[0007] 步骤2 :取IOOg残渣置于IL锥形瓶中，缓缓加入ILI. 75mol蔗糖溶液，边加 边用玻璃棒充分搅拌，静置20min，等待休眠卵充分上浮，取上层悬浮液；
[0008] 步骤3 :重复步骤2,抽提2-3遍，合并上层悬浮液采用低速大容量离心机3000r/ min离心 5min;
[0009] 步骤4 :收集上清液，采用200ym、30ym筛絹过滤，去除轮虫、藻类及蔗糖残留；
[0010] 步骤5 :收集30ym筛絹上的休眠卵采用去离子水冲洗2-3遍，获得纯化休眠卵。
[0011] 与现有技术相比，本发明的有益效果为：本发明以萼花臂尾轮虫为研宄对象摸索 出了一套分离纯化办法，既能达到快速分离的目的，又不会对其萌发率造成影响，以期为后 续大规模商品化生产提供借鉴。
【附图说明】
[0012] 图1是本发明实施例不同抽提方法下休眠卵回收数量对比结果示意图。
【具体实施方式】
[0013] 下面结合具体附图和实施例对本发明的技术方案作进一步详细地说明。
[0014] 本发明的原理为：
[0015] 1、采用虹吸方法将底部培养液吸出，沉淀浓缩，留下底部蕴藏休眠卵的残渣；
[0016] 2、加入蔗糖高渗溶液，杀死残余藻类及轮虫，休眠卵外壁厚实，受渗透压影响不大 所以活力不受任何影响；
[0017] 3、利用密度悬浮原理梯度离心将休眠卵与密度大的杂质悬浮分离；
[0018] 4、利用体积大小不同原理，采用过滤分离的方法将藻、轮虫以及休眠卵彻底分开。
[0019] 实施例
[0020] 取生长旺盛处于指数培养期的轮虫培养液5L置于锥形瓶中，停止充气并从藻类 改投酵母供饵，每日镜检观察，待种群进入有性生殖产生大量休眠卵停止培养。
[0021] 采用塑料软管伸入锥形瓶底部虹吸出底部培养物（内含大量休眠卵），转移到 50mL离心管中（5ml左右残渣），缓慢加入ILI. 75m〇l吨4蔗糖溶液补齐到50ml，涡旋振荡 30S，3000r/min离心5min，取上层悬浮液，采用浮游动物计数框统计休眠卵数。梯度离心筛 选法抽提休眠卵数量如表1所示。
[0022] 表1梯度离心筛选法抽提休眠卵数量
[0023]
【主权项】
1. 一种萼花臂尾轮虫室内高密度培养休眠卵的分离纯化方法，其特征在于，包括以下 步骤： 步骤1 :利用塑料软管虹吸浓缩培养液，收集容器底部含休眠卵的残渣； 步骤2 :取IOOg残渣置于IL锥形瓶中，缓缓加入IL I. 75mol ·Γ1蔗糖溶液，边加边用 玻璃棒充分搅拌，静置20min，等待休眠卵充分上浮，取上层悬浮液； 步骤3 :重复步骤2,抽提2-3遍，合并上层悬浮液采用低速大容量离心机3000r/min离 心 5min ; 步骤4 :收集上清液，采用200 μ m、30 μ m筛絹过滤，去除轮虫、藻类及蔗糖残留； 步骤5 :收集30 μ m筛絹上的休眠卵采用去离子水冲洗2-3遍，获得纯化休眠卵。
【专利摘要】本发明公开了一种萼花臂尾轮虫室内高密度培养休眠卵的分离纯化方法，利用塑料软管虹吸浓缩培养液，收集容器底部含休眠卵的残渣；取100g残渣置于1L锥形瓶中，缓缓加入1L1.75mol·L-1蔗糖溶液，边加边用玻璃棒充分搅拌，静置20min，等待休眠卵充分上浮，取上层悬浮液；抽提2-3遍，合并上层悬浮液采用低速大容量离心机3000r/min离心5min；收集上清液，采用200μm、30μm筛绢过滤，去除轮虫、藻类及蔗糖残留；收集30μm筛绢上的休眠卵采用去离子水冲洗2-3遍，获得纯化休眠卵。本发明既能达到快速分离的目的，又不会对其萌发率造成影响，以期为后续大规模商品化生产提供借鉴。
【IPC分类】A01K67-033
【公开号】CN104585141
【申请号】CN201510027066
【发明人】封琦, 王建国, 袁圣, 齐富刚, 李伟
【申请人】江苏农牧科技职业学院
【公开日】2015年5月6日
【申请日】2015年1月16日