一种秋水仙素处理草地早熟禾种子的方法与流程

本发明属于植物生物，主要涉及一种秋水仙素处理草地早熟禾种子的方法。

背景技术：

1、草地早熟禾属禾本科属植物，作为我国北方常用冷季型草坪草种，具有成坪速度快、叶片柔软、叶色深绿、可持续绿期长等特点，是一种优良的草坪绿化植物，但草地早熟禾生产中种子萌发率低，污染率高，萌发速度慢，限制了草地早熟禾的推广与应用，目前，我国草地早熟禾品种数量非常少，通过审定登记的品种仅有9个，能够用于草坪建植的品种多数为引进品种，因此，开展草地早熟禾品种选育工作，为我国北方草坪建植提供优质种源，成为了我国草坪建设中亟待解决的问题。

技术实现思路

1、本发明提供一种秋水仙素处理草地早熟禾种子的方法，以提高利用秋水仙素对草地早熟禾进行诱变的效率，使用本发明进行化学诱变育种时，草地早熟禾种子污染率较低，诱变后的组培苗成活率较高，具体方案步骤：

2、s1、浸泡：挑选饱满的草地早熟禾种子于无菌水中浸泡23-25h，将未吸涨的种子挑出，然后放于滤纸中回干23-25h备用；

3、s2、一次消毒：将回干的种子用75%无水乙醇处理50-70s，无菌水冲洗种子30s，冲洗2-3次；

4、s3、二次消毒：将一次消毒过的种子放入10%的次氯酸钠溶液中浸泡24-26min，无菌水冲洗30s，冲洗4-6次，再用无菌滤纸吸干；

5、s4、培养发芽：将二次消毒完成的种子摆放到发芽盒中，在温度为19℃-22℃的条件下，光照培养15-17h，黑暗培养7-9h；

6、s5、秋水仙素处理：将培养发芽过的种子转入0.04%-0.06%的秋水仙素液中浸泡5.5-6.5h，所述秋水仙素液中含2%的dmso；

7、s6、三次消毒：将0.1g hgcl2溶于100ml蒸馏水中配制成0.1%的升汞溶液，将秋水仙素液浸泡过的种子用无菌水冲洗2-4次，再用0.1%的升汞溶液进行消毒，消毒时间为1.5-2.5min；

8、s7、接种：将三次消毒后的种子用无菌水冲洗2-4次，无菌滤纸吸干水分，接种到ms培养基中培养。

9、而且，一种秋水仙素处理草地早熟禾种子的方法，包括如下步骤：

10、s1、浸泡：挑选饱满的草地早熟禾种子于无菌水中浸泡24h，将未吸涨的种子挑出，然后放于滤纸中回干24h备用；

11、s2、一次消毒：将回干的种子用75%无水乙醇处理60s，无菌水冲洗种子30s，冲洗3次；

12、s3、二次消毒：将一次消毒过的种子放入10%的次氯酸钠溶液中浸泡25min，无菌水冲洗30s，冲洗5次，再用无菌滤纸吸干；

13、s4、培养发芽：将二次消毒完成的种子摆放到发芽盒中培养发芽；

14、s5、秋水仙素处理：将培养发芽过的种子转入0.05%的秋水仙素液中浸泡6h ，所述秋水仙素液中含2%的dmso；

15、s6、三次消毒：将秋水仙素液浸泡过的种子用无菌水冲洗3次，再用升汞溶液进行消毒；

16、s7、接种：将三次消毒后的种子用无菌水冲洗3次，无菌滤纸吸干水分，接种到ms培养基中培养。

17、而且，所述秋水仙素液为：将0.14g-0.16g的秋水仙素粉末加入4.5ml dmso中，再加入蒸馏水定容至300 ml，搅拌均匀。

18、而且，步骤s4中，发芽盒用酒精消毒后铺有两层无菌滤纸。

19、而且，步骤s4中，培养发芽期间，每隔24h补充一次水分，并挑出发霉种子。

20、而且，步骤s5中，培养发芽过的种子为吸涨并露白的种子。

21、与现有技术相比，本发明的有益效果是：

22、1、本发明提供一种秋水仙素处理草地早熟禾种子的方法，提高了秋水仙素对草地早熟禾诱变的效率，使用本发明进行化学诱变育种时，草地早熟禾种子污染率较低，诱变后的组培苗成活率较高。

23、2、本发明将草地早熟禾种子用75%无水乙醇处理50-70s，无菌水冲洗种子2-3次，又加入10%的次氯酸钠溶液中浸泡24-26min，无菌水冲洗4-6次，处理后的种子污染率仅为5.1%，发芽率达83.5%，降低了草地早熟禾种子的污染率，提高了发芽率，为草地早熟禾的繁殖提供了有利的条件。

24、3、本发明在草地早熟禾降低污染的基础上，进一步采用0.04%-0.06%的秋水仙素液中浸泡种子5.5-6.5h ，使草地早熟禾的成活率达到95.72%，大幅度的提高了草地早熟禾的成活率，为草地早熟禾的推广与应用奠定了基础。

技术特征：

1.一种秋水仙素处理草地早熟禾种子的方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.如权利要求1所述的一种秋水仙素处理草地早熟禾种子的方法，其特征在于，包括如下步骤：

3.如权利要求1所述的一种秋水仙素处理草地早熟禾种子的方法，其特征在于，步骤s4中，发芽盒用酒精消毒后铺有两层无菌滤纸。

4.如权利要求1所述的一种秋水仙素处理草地早熟禾种子的方法，其特征在于，步骤s4中，培养发芽期间，每隔24h补充一次水分，并挑出发霉种子。

5.如权利要求1所述的一种秋水仙素处理草地早熟禾种子的方法，其特征在于，步骤s5中，培养发芽过的种子为吸涨并露白的种子。

6.如权利要求1所述的一种秋水仙素处理草地早熟禾种子的方法，其特征在于，步骤s6中，升汞溶液为将0.1g hgcl2溶于100ml蒸馏水中配制成0.1%的升汞溶液，消毒时间为1.5-2.5min。

7.如权利要求1所述的一种秋水仙素处理草地早熟禾种子的方法，其特征在于，步骤s4中，培养发芽的方法为：在温度为19℃-22℃的条件下，光照培养15-17h，黑暗培养7-9h。

技术总结
一种秋水仙素处理草地早熟禾种子的方法，包括如下步骤：挑选饱满的草地早熟禾种子于无菌水中浸泡23‑25h，将未吸涨的种子挑出，然后回干23‑25h；将回干的种子用75%无水乙醇处理50‑70s，无菌水冲洗种子30s，冲洗2‑3次；将一次消毒过的种子放入10%的次氯酸钠溶液中浸泡24‑26min，无菌水冲洗30s，冲洗4‑6次，再用无菌滤纸吸干；将二次消毒完成的种子摆放到发芽盒中培养发芽；将培养发芽过的种子转入0.04%‑0.06%的秋水仙素液中浸泡5.5‑6.5 h，用无菌水冲洗2‑4次，再用升汞溶液进行消毒用无菌水冲洗2‑4次，无菌滤纸吸干水分，接种到MS培养基中培养；使用本发明进行化学诱变育种时，草地早熟禾种子污染率较低，诱变后的组培苗成活率较高。

技术研发人员：贾振宇,于立霞,王召明,樊俊梅,刘长涛,张跃华,马怀林,刘亚玲,郭嘉璐,赵冬莲,白杨,田振东,苏欣宇,金悦
受保护的技术使用者：蒙草生态环境（集团）股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15