本发明涉及一种藤三七离体再生体系建立的方法,属于植物组织培养技术领域,主要应用于藤三七种苗繁殖。
背景技术:
藤三七(boussingaultiagracilismiersvar.baselloidesbail.),为落葵科(basellaceae)落葵薯属(boussingaultiah.b.k.)植物,原名心形落葵薯,别称落葵薯、洋落葵、川七、土川七、藤子三七、小年药、土三七、马德拉藤、金钱珠、中枝莲、田三七等,原产巴西,我国江苏、浙江、福建、四川、贵州、云南等地均有栽培。藤三七为多年生缠绕草质藤本植物,茎蔓肉质,呈圆形至椭圆形,初期为浅紫红色,缠绕性强,节间易发生不定根。
由于藤三七中具有各新黄烷醇和抗hiv活性成分等,所以具有相当高的药用保健价值,并且富含各种维生素,作为一种新兴蔬菜,市场对其需求量增加。迄今为止,在国外和国内的某些省份已经有了比较完整的栽培管理理论和技术,其繁殖方式主要是以扦插为主,不能满足市场的要求,而无性繁殖会导致病毒累积,品质退化。前人对藤三七的离体培养已有部分研究,其中包括蒋向辉和肖树林分别以藤三七嫩叶和带芽茎段为外植体,通过愈伤组织手段建立组培快繁体系,为藤三七在这一领域的研究奠定基础,但是愈伤组织分化成苗需要一定时间,而且也容易发生变异,作为商业化推广,有一定限制。而本发明以带芽茎段作外植体直接诱导不定芽,避免了愈伤组织这个过程,可以缩短周期,减少变异,更具有商业推广前景。
技术实现要素:
本发明的目的在于提供一种藤三七离体再生体系建立的方法,避免了愈伤组织这个过程,可以缩短周期,减少变异,更具有商业推广前景。
为实现上述目的,采用以下技术方案:
一种藤三七离体再生体系建立的方法,包括以下步骤:
(1)藤三七外植体的获得;
(2)初代培养;
(3)继代增殖培养;
(4)生根培养;
(5)炼苗移栽。
步骤(1)所述的藤三七外植体的获得方法为:取2~3cm带叶芽的野生藤三七茎段,用自来水冲洗30min;首先用75%的酒精消毒30秒;用无菌水冲洗1~2次;再将茎段放入0.1%的升汞中消毒4-12min;然后将外植体捞出放入无菌水中浸泡2min,再用无菌水分别冲洗4-5次;最后将藤三七茎段播种入ms培养基中培养获得不定芽。放置在白光条件下,光照强度1500lx,光照时间14h/d,培养温度为25±2℃,培养15d获得不定芽。
步骤(2)所述的初代培养为:从长势一致的试管材料中取大小相同的不定芽作为外植体,接种在ms培养基中,放置在白光条件下培养。光照强度1500lx,光照时间14h/d,培养温度为25±2℃,培养25d。
步骤(3)继代增殖培养方法为:以ms为基本培养基,添加6-ba1.6mg/l和naa0.6mg/l;从步骤(2)中接种25d的无菌苗切取带叶芽茎段2-3cm接入以上培养基中;置于培养室中培养。放置在白光条件下,光照强度1500lx,光照时间14h/d,培养温度为25±2℃,培养3周。
步骤(4)所述的生根培养方法为:从步骤(3)中长势一致的试管材料中取大小相同的不定芽作为外植体,接种ms培养基加iba1.5mg/l进行生根培养,放置在白光条件下培养。光照强度1500lx,光照时间14h/d,培养温度为25±2℃,培养15d。
步骤(5)所述的炼苗移栽方法为:将经过生根培养后长势较一致的生根幼苗从培养室中取出,放置在室温下进行炼苗处理,一天后打开瓶盖,再放置三天,然后取出洗去根上的培养基,栽种于菜园土栽培基质中。
本发明的优点在于:传统方法中以藤三七嫩叶和带芽茎段为外植体,愈伤组织分化成苗需要一定时间,而且也容易发生变异,作为商业化推广,有一定限制。而本发明以带芽茎段作外植体直接诱导不定芽,避免了愈伤组织这个过程,且增殖系数高达15.31±0.28,还没有报道超过此系数,可以缩短育苗周期,减少变异,种苗商品性高,更具有商业推广前景。
附图说明
图1无菌体系的建立。
图2初代培养的过程。
图3继代增殖的过程。
图4移栽的结果图。
具体实施方式
实施例1
1.藤三七外植体的获得
取藤三七根部以上10cm左右至离茎顶端10cm左右部位,剪成2~3cm带叶芽茎段为外植体,用自来水冲洗30min。首先用75%的酒精消毒30秒;用无菌水冲洗2次;再将茎段放入0.1%的升汞中消毒8min;然后将外植体捞出放入无菌水中浸泡2min,再用无菌水分别冲洗5次。最后将藤三七茎段播种入ms培养基中培养获得不定芽,放置在白光条件下,光照强度1500lx,光照时间14h/d,培养温度为25±2℃,培养15d。
2.初代培养
从长势一致的试管材料中取大小相同的不定芽作为外植体,接种在ms培养基中,然后放置在白光条件下培养,光照强度1500lx,光照时间14h/d,培养温度为25±2℃,培养25d。获得藤三七试管苗初代材料。
3.继代增殖培养
将步骤2中的藤三七初代培养苗接种在附加6-ba1.6mg/l和naa0.6mg/l的ms培养基上,放置在白光条件下进行培养,光照强度1500lx,光照时间14h/d,培养温度为25±2℃,培养3周。藤三七不定芽的诱导效果较好,增殖系数可达15.31±0.28。
4.生根培养
从步骤3中的藤三七试管苗接种在ms+1.5mg/liba培养基中,放置在白光条件下,光照强度1500lx,光照时间14h/d,培养温度为25±2℃,培养15d。生根效果好,试管苗生根率达到94.44%。
5.驯化移栽
藤三七试管苗放置在室温下进行炼苗处理,一天后打开瓶盖,再放置三天,从培养瓶中取出,洗去根部培养基,移入菜园土栽培基质中,保湿遮阴,成活率达95%以上。
以上所述仅为本发明的较佳实施例,凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰,皆应属本发明的涵盖范围。