本发明涉及一种复合益生菌生物消毒剂的制备方法。
背景技术：
我国畜禽养殖业的快速发展带来了严重的环境污染问题，其中病原微生物污染是影响畜禽舍环境质量的重要因素。研究表明，畜禽舍环境中的微生物含量与疾病发病率有着显著的关系，给畜禽生产和人类健康带来了严重的威胁。因此，降低畜禽舍环境中的微生物水平，是控制疾病流行、净化养殖环境的关键环节。定期消毒是目前畜禽舍环境净化的重要措施，消毒的方式主要有冲洗、浸液、紫外和喷雾等4种方式，常用消毒剂为含氯、有机碘混合物或酚类等的化学消毒剂。然而，随着化学消毒剂的大量使用，其潜在的化学毒性、腐蚀性、不稳定性以及细菌耐药性等问题日益凸显。
因此，研发绿色环保的生物消毒剂改善畜禽舍环境、控制病原微生物，对于提高畜禽健康水平，促进畜牧业健康发展显得尤为重要。益生菌以天然无毒、无副作用、元残留，可以促进机体微生态平衡、抑制有害菌生长等优势已经成为畜牧业研究的热点。
目前，益生菌不仅作为一种新型绿色饲料添加剂在提高畜禽生产性能方面显示了良好的应用效果，而且在发酵床养殖模式中通过对垫料和畜禽粪便的协同发酵，促进了养殖环境净化与畜禽健康。辛国芹等报道，使用抗菌肽与乳酸菌混合制剂进行肉鸡场环境消毒，可显著提高肉鸡生产性能及免疫性能；陈静等报道，微生态喷雾剂可以有效降低蛋鸡舍NH。和H.S含量；仝永娟报道，规模化肉鸡舍喷洒芽孢杆菌复合制剂可以有效抑制大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的数量，并对鸡只的生长和免疫健康有一定的促进作用。然而，利用益生菌对规模化鸭场进行生物消毒的研究尚鲜见报道。
本研究以项目组前期从河南某规模肉鸭场分离鉴定获得的3种益生菌菌株为材料，基于不同益生菌的协同作用，研制复合益生菌生物消毒剂，并以常规化学消毒剂为对照，对其实际应用效果进行了考察，以期为利用益生菌进行畜禽舍生物消毒提供依据。
技术实现要素：
本发明提出一种复合益生菌生物消毒剂的制备方法。
一种复合益生菌生物消毒剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）对枯草芽孢杆菌、乳酸杆菌、酵母菌3种益生菌菌株分别进行活化与种子培养；然后将其种子培养液按体积分数5％的接种量分别接种到相应的50L发酵罐中进行发酵培养；
（2）所述枯草芽孢杆菌的培养温度为35℃，初始pH7，转速120r／min，通气量1.1vvm，24h后每隔2h取样1次，测定产芽孢率，当产芽孢率达到90％以上时停止发酵；
（3）乳酸杆菌的培养温度为32-41℃，初始pH6.5，培养时间28h；
（4）酵母菌的培养温度为25-30℃，初始pH6.0，转速120r／min，通气量0.8vvm，培养时间48h；
（5）发酵结束后，使用0.2μm微滤膜分别对3种益生菌发酵液进行浓缩，活菌数不少于1×1011CFU／mL。
优选地，所述步骤（2）发酵温度稳33℃。
优选地，所述步骤（4）发酵温度稳28℃。
本发明所述方法制备的复合益生菌生物消毒剂能显著降低鸭舍内NH3含量与活菌数，而且可以显著提高肉鸭平均日增质量、降低料肉比，对抑制肉鸭盲肠大肠杆菌的生长，促进乳酸杆菌的增殖有显著效果。
具体实施方式
实施例1。
一种复合益生菌生物消毒剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）对枯草芽孢杆菌、乳酸杆菌、酵母菌3种益生菌菌株分别进行活化与种子培养；然后将其种子培养液按体积分数5％的接种量分别接种到相应的50L发酵罐中进行发酵培养；
（2）所述枯草芽孢杆菌的培养温度为35℃，初始pH7，转速120r／min，通气量1.1vvm，24h后每隔2h取样1次，测定产芽孢率，当产芽孢率达到90％以上时停止发酵；
（3）乳酸杆菌的培养温度为32-41℃，初始pH6.5，培养时间28h；
（4）酵母菌的培养温度为25-30℃，初始pH6.0，转速120r／min，通气量0.8vvm，培养时间48h；
（5）发酵结束后，使用0.2μm微滤膜分别对3种益生菌发酵液进行浓缩，活菌数不少于1×1011CFU／mL。
实施例2。
一种复合益生菌生物消毒剂的制备方法，包括以下步骤：
（1）对枯草芽孢杆菌、乳酸杆菌、酵母菌3种益生菌菌株分别进行活化与种子培养；然后将其种子培养液按体积分数5％的接种量分别接种到相应的50L发酵罐中进行发酵培养；
（2）所述枯草芽孢杆菌的培养温度为35℃，初始pH7，转速120r／min，通气量1.1vvm，24h后每隔2h取样1次，测定产芽孢率，当产芽孢率达到90％以上时停止发酵；
（3）乳酸杆菌的培养温度为32-41℃，初始pH6.5，培养时间28h；
（4）酵母菌的培养温度为25-30℃，初始pH6.0，转速120r／min，通气量0.8vvm，培养时间48h；
（5）发酵结束后，使用0.2μm微滤膜分别对3种益生菌发酵液进行浓缩，活菌数不少于1×1011CFU／mL；
（6）所述步骤（2）发酵温度稳33℃。
实施例3。
一种复合益生菌生物消毒剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）对枯草芽孢杆菌、乳酸杆菌、酵母菌3种益生菌菌株分别进行活化与种子培养；然后将其种子培养液按体积分数5％的接种量分别接种到相应的50L发酵罐中进行发酵培养；
（2）所述枯草芽孢杆菌的培养温度为35℃，初始pH7，转速120r／min，通气量1.1vvm，24h后每隔2h取样1次，测定产芽孢率，当产芽孢率达到90％以上时停止发酵；
（3）乳酸杆菌的培养温度为32-41℃，初始pH6.5，培养时间28h；
（4）酵母菌的培养温度为25-30℃，初始pH6.0，转速120r／min，通气量0.8vvm，培养时间48h；
（5）发酵结束后，使用0.2μm微滤膜分别对3种益生菌发酵液进行浓缩，活菌数不少于1×1011CFU／mL；
（6）所述步骤（4）发酵温度稳28℃。