四霉素p在抑制黄瓜立枯病菌和番茄灰霉病菌中的应用的利记博彩app
【专利摘要】本发明公开了四霉素P在抑制黄瓜立枯病菌和番茄灰霉病菌中的应用，属于微生物【技术领域】。该方法利用一种从浙江杭州临安天目山采集的土样中分离筛选出的淀粉酶产色链霉菌D，经过菌种的活化培养，发酵培养，收集发酵液，按常规化学方法提取、层析，分离纯化获得活性化合物四霉素P（Tetramycin P），该化合物为新的四烯大环内酯类抗生素，并可抑制黄瓜枯萎病菌和番茄灰霉病菌等作物病原真菌的生长，抑制效果较常规化学药剂强。
CGMCC No. 2060
20070525
【专利说明】四霉素P在抑制黄瓜立枯病囷和番前灰霉病囷中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及微生物【技术领域】，特别是涉及新化合物四霉素P的制备方法及其对植 物病原真菌的抑制作用。
【背景技术】
[0002] 由不同病原菌引起的作物病害中，约有70%的病害是由真菌引起的。多烯大环内 酯类抗生素是一类具有多个共轭双键的抗生素，其紫外吸收呈指状，特征非常明显。根据共 轭双键的数目，多烯类抗生素可分为三烯、四烯、五烯、六烯、七烯等5类，通常具有很强的 抗真菌活性，且抗真菌谱广，对作物主要病原真菌如黄瓜立枯病菌so/afli)、 番前灰霉病菌ciflerea)、番前早疫病菌so/afli)、小麦赤霉病菌 和黄瓜枯萎病菌（Z7. ;对粮食和饲料中常见的霉菌 如黄曲霉〇^5/76?/足/#^5 /yaras)、赫曲霉（A ocAracc^s)和黑曲霉（A fliger)，以及酿酒 酵母等均有活性。据报道该类抗生素目前主要在医药上应用 较多，若以多烯大环内酯类化合物为主要活性成分开发成广谱抗真菌生物制剂，将为农业 生产提供良好的生防材料。
[0003]目前对植物病害的防治，主要采用化学农药杀灭病原菌，但化学农药对人畜的毒 副作用和残留问题至今仍难以有效的解决。利用放线菌产生的抗病原真菌的活性物质进行 植物病原真菌病害的生物防治，则具有周期短、易于研宄、便于生产、无毒无害等优点。
【发明内容】
[0004]本发明从杭州的土壤中分离到一株生防放线菌，并对此生防放线菌发酵代谢产物 中的抗菌成分进行分离，得到了主要活性成分，经四大光谱分析，明确了其结构式。该发明 为微生物农药的进一步研制和开发提供优良的出发菌株和生物活性化合物。
[0005]本发明的目的是针对化学农药不安全与微生物农药种类较少的不足，提供一种新 的抗植物病原真菌活性化合物；本发明的另一目的是提供该活性化合物在植物病害上的防 治作用。
[0006]本发明淀粉酶产色链霉菌的分离、筛选与鉴定： 是于2006年8月在浙江杭州临安天目山采集的土样中，经分离、培养、发酵、活性测 定以及对抑制植物真菌病害病原菌有效菌株的筛选等步骤获得并保存；经微生物分类学鉴 定为淀粉酶产色链霉菌（t/iastetocAroffiogefles)，定名为淀粉酶产色链霉菌 (51 (ocAroffiogefles) D。该菌株已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中 心保藏，保藏地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期2007年5月25日，保藏登 记号 CGMCCNo. 2060。
[0007] 淀粉酶产色链霉菌D显微形态特征：孢子丝直、钩状、松散螺旋形，孢子长圆、椭圆 或卵圆形。
[0008]本发明所述的淀粉酶产色链霉菌D，经发酵提取可获得对部分植物真菌病害病原 菌具有抑制作用的活性化合物，该化合物的化学名称为（7忍124 13忍15忍17忍19万 )-21-((4-amin〇-3, 5-dihydroxy -6- methyltetrahydr〇-2//-pyran -2-yl) oxy -12 -ethylidene -1,5,6,25 - tetrahydroxy -11- methyl-9 -〇xo_10, 27 - dioxabicyclo [21.3.1] heptacosa-7, 13, 15, 17, 19-pentaene-24-carboxylic acid，是一种新的四 烯大环内酯类化合物，已有文献中未见有报道，中文名称命名为四霉素P，英文名称为 Tetramycin P〇
[0009] 本发明目的通过以下技术方案来实现： 四霉素P在抑制黄瓜立枯病菌和番茄灰霉病菌中的应用，按以下步骤进行： (1) 菌种的活化培养：将分离保存的淀粉酶产色链霉菌D菌种移至试管内高氏一号斜 面上，在28°C ±1°C条件下，培养至试管斜面长满孢子； (2) 发酵培养：发酵培养液为每1000 mL中含有可溶性淀粉20 g，黄豆粉40 g，NH4C1 3 g，CaC03 5 g，MgS04 2 g，灭菌，待冷却至50 °C，在无菌条件下接种淀粉酶产色链霉菌D 至发酵培养液中，在28°C ±1°C条件下，培养5天； (3) 发酵物提取：发酵完毕，收集发酵液，按常规化学方法提取、层析，分离纯化获得活 性化合物Tetramycin P，该化合物分子式为C35H51013N，结构式见下式；
【权利要求】
1. 四霉素P在抑制黄瓜立枯病菌和番茄灰霉病菌中的应用，其中四霉素P结构式为：
2. 权利要求1所述的应用，其中四霉素P由以下方法获得：淀粉酶产色链霉菌D经斜 面活化培养、发酵培养获得含有四霉素P的发酵液，加入等体积乙酸乙酯萃取，取下层，再 用等体积正丁醇萃取，取上层，在真空条件下浓缩至浸膏，该浸膏再用甲醇溶解，离心取上 清液，而后上ODS柱，以甲醇和水(体积比10[90%)洗脱，进一步分离纯化得活性化合物 TetramycinP(四霉素P)，所述的淀粉酶产色链霉菌D保藏登记号为CGMCCNo. 2060。
【文档编号】A01P3/00GK104430407SQ201410784196
【公开日】2015年3月25日 申请日期:2014年12月18日 优先权日:2014年12月18日
【发明者】申屠旭萍, 俞晓平, 刘楠楠, 郝培应, 王正亮, 刘光富, 许益鹏 申请人:中国计量学院