一种高效快速生产白芨种苗的方法
【专利摘要】本发明的目的是提供一种高效快速生产白芨种苗的方法。包括两个培养阶段，(1)液体培养阶段，具体步骤包括用次氯酸钠对白芨蒴果消毒，切开蒴果，将种子播撒于液体培养基中培养，待种子发育成原球茎；(2)固体培养基培养阶段，具体步骤包括诱导原球茎分化成无根苗，转移至生根培养基进行生根培养，移栽到温室大棚内的栽培基质，进行大田移栽前的驯化。本发明实现了白芨种苗高效快速生产，与全程固体培养相比，克服了前期种子在固体培养基上培养时种子萌发率低的弊端，种子萌发率显著提高，达到99%；原球茎的鲜重和干重大幅度提升；并显著缩短了整个生产周期，可缩短至110天左右。
【专利说明】一种高效快速生产白芨种苗的方法
【技术领域】
[0001]本发明属于植物快速繁殖【技术领域】，具体涉及一种高效快速生产白芨种苗的方法。
【背景技术】
[0002]Striata (Thunb.) Reichb.f.)为白芨属多年生草本植物，是国家重点保护野生植物，不仅观赏价值较高，亦是常用中药之一。白芨以干燥块茎入药，具有收敛止血，消肿生肌的功效；对咯血、吐血、便血及外伤止血、疮疡肿毒、手足跋裂等有较好疗效，广泛用于治疗肺结核及支气管扩张咯血、胃溃疡出血等症，白芨主要销售对象有医院、生物制药公司、药材经销商、化工厂等，其用途不仅体现在人们生活中常用的各式各样的胃药、医疗手术中的缝合剂、外伤出血、烧烫伤、手足破裂等症的治疗上，还体现在园林观赏应用，女性的护肤化妆品，男性抽烟的高级卷烟烟蒂胶，工业上的糊料、浆丝绸、浆纱或作涂料等原料以及酿酒等中。
[0003]近年来，随着不断攀升的市场需求，野生白芨遭到过度采挖，野生白芨资源已濒临灭绝。解决白芨种苗快速繁殖技术是缓解市场供需矛盾的关键。而现有的种苗快繁通常整个生产过程采取了种子播种到固体培养基上，然后再经过分化、生根等阶段，导种子萌发率低、原球茎生长发育迟缓、生产周期长等问题。
【发明内容】
[0004]本发明提供一种高效快速生产白芨种苗的方法，其目的是通过第一阶段的液体振荡培养和第二阶段的固体培养，以求克服全程固体培养的一些弊端，提高白芨种子萌发率，提升原球茎的鲜重和干重，加快原球茎生长速度，从而缩短生产周期。它是先将白芨种子置于液体培养基中培养，待种子发育成原球茎后，再诱导分化成苗，然后再移至温室大棚驯化。
[0005]采用本发明的有益效果是在前期培养阶段充分考虑到白芨种子萌发、原球茎生长特点，采用液体培养，使得种子和原球茎充分接触营养物质，加快了种子萌发和原球茎生长发育速度；同时也充分考虑到分化、生根、驯化等发育阶段的营养和生长特点，培养基和驯化基质合理配方，驯化基质保肥，保水，透气性好，多孔性极大促进了植物的虚根系生长和发育，对白芨小苗有着极好的固定作用；最终实现了白芨种苗高效快速生产，种子萌发率显著提高，达到99%，原球茎生长发育迅速，整个生产周期可缩短至110天左右。
[0006]本发明提供的一种高效快速生产白芨种苗的方法包括以下步骤。
[0007]将白芨蒴果先用酒精浸泡30~50秒，再放置于有效氯浓度为0.3-0.8%的次氯酸钠水溶液中浸泡10~15分钟，再用无菌水漂洗3~4次。
[0008]将消毒后的蒴果切开，将白芨种子播撒于液体培养基，振荡培养；液体培养基组成为:1/4MS培养基+6-苄基嘌呤0.3-0.8毫克/升+萘乙酸2.5-3.2毫克/升+ 土豆汁120-150克/升+蔗糖25-30克/升+pH 5.8-6.3 ;液体培养条件为，在18~24摄氏度、转速180~230转/分钟、光照度1800~2300勒克斯、光照时间4~6小时/天的条件下，振荡培养15~20天，种子萌发形成原球茎。
[0009]将得到的原球茎置于分化培养基中，在25~28摄氏度、光照度2000~2500勒克斯、光照时间10~12小时/天的条件下培养30~40天，先分化成小芽，再变成具有3片叶的无根小苗；分化培养基组成为:MS培养基+萘乙酸0.5~0.8毫克/升+6-苄基嘌呤1.3~1.5毫克/升+香蕉汁100~110克/升+蔗糖25~3 O克/升+琼脂6~7克 / 升 +pH5.6 ~5.8。
[0010]将得到的小苗转移到生根培养基中，温度控制在24~28摄氏度，培养30~40天后，得到2~3.5厘米高的成苗；其中，所述的生根培养基组成为:MS培养基+萘乙酸2.5~3毫克/升+蔗糖25~30克/升+活性炭0.5~0.8毫克/升+琼脂7-8克/升+pH6 ~6.2。
[0011]将得到的成苗从瓶内取出用清水冲洗去除培养基后，用多菌灵溶液浸泡30~60分钟，移栽到温室大棚内的栽培基质中；栽培基质为珍珠岩、蛭石与草炭土按体积(0.4~0.7) (1.5~2): (2.5~3)组成的混合物；其中珍珠岩粒径4~7 mm，蛭石的粒径为3~4mm,草炭土的有机物含量为30%~40% ;培养20天左右，即为生产的种苗。
[0012]本发明最终实现了白芨种苗高效快速生产，种子萌发率显著提高，达到99%，原球茎生长发育迅速，整个生产周期可缩短至110天左右。
【专利附图】
【附图说明】
[0013]图1:白芨种子在液体培养基中的萌发情况。
[0014]图2:培养得到`的白芨原球茎(其中图ABC为液体培养基培养的原球茎，图D为固体培养基培养的原球茎)。
[0015]图3:固体培养基培养阶段的白芨。
[0016]图4:白芨刚移栽到穴盘后的生长情况(其中图ABC为液体培养基来源的白芨苗，图D为固体培养基来源的白芨苗)。
[0017]图5:生产的种苗。
【具体实施方式】
[0018]本发明突出的特点和显著进步可以从下述实例中得以体现，但不会对本发明作任何限制。
[0019]实施例1:
将白芨蒴果先用酒精浸泡35秒，再放置于有效氯浓度为0.8%的次氯酸钠水溶液中浸泡10分钟，再用无菌水漂洗3~4次。
[0020]将消毒后的蒴果切开，将白芨种子播撒于液体培养基，振荡培养；种子萌发后的生长情况见图1A ;同时也将种子撒播于固体培养基，作为对照实验组；液体培养基组成为:1/4MS培养基+6-苄基嘌呤0.6毫克/升+萘乙酸3.1毫克/升+ 土豆汁150克/升+蔗糖30克/升+pH 6.2 ;固体培养基组成出加琼脂7克/升外，其它成分同液体培养基；液体培养条件为，在19摄氏度、转速220转/分钟、光照度2200勒克斯、光照时间6小时/天的条件下，振荡培养19天，种子萌发形成原球茎，见图2A，500粒原球茎鲜重为4.243克，干重为0.421克；固体培养基培养条件为:19摄氏度、光照度2200勒克斯、光照时间6小时/天的条件下，培养33天，种子萌发形成原球茎，见图2D，500粒原球茎鲜重为0.924克，干重为0.109克。
[0021]将得到的原球茎置于分化培养基中，在28摄氏度、光照度2500勒克斯、光照时间11小时/天的条件下培养32天，先分化成小芽，再变成具有3片叶的无根小苗，而在同样地培养条件下，固体培养基培养出来的原球茎长成3片叶的无根小苗须要42天左右；分化培养基组成为:MS培养基+萘乙酸0.8毫克/升+6-苄基嘌呤1.4毫克/升+香蕉汁100~110克/升+蔗糖3 O克/升+琼脂7克/升+PH5.8。
[0022]将得到的小苗转移到生根培养基中，温度控制在27摄氏度，培养35天后，得到2~3.5厘米高的成苗；而在同样地培养条件下，固体培养基来源的小苗长成生根成苗需要45天；其中，所述的生根培养基组成为:MS培养基+萘乙酸2.8毫克/升+蔗糖30克/升+活性炭0.8毫克/升+琼脂8克/升+pH 6.2。
[0023]将得到的成苗从瓶内取出用清水冲洗去除培养基后，用多菌灵溶液浸泡50分钟，移栽到温室大棚内的栽培基质中，见图4 ;栽培基质为珍珠岩、蛭石与草炭土按体积0.6::2:2.8组成的混合物；其中珍珠岩粒径4~6 mm，蛭石的粒径为3~4 mm，草炭土的有机物含量为38% ;培养20天左右，即为生产的种苗；而在同样地培养条件下，固体培养基来源的白芨苗驯化需要30左右。
[0024]实施例2:
将白芨蒴果先用酒精浸泡35秒，再放置于0.5%的次氯酸钠水溶液中浸泡15分钟，再用无菌水漂洗3~4次 。
[0025]将消毒后的蒴果切开，将白芨种子播撒于液体培养基，振荡培养；种子萌发后的生长情况见图1B ;液体培养基组成为:1/4MS培养基+6-苄基嘌呤0.3毫克/升+萘乙酸2.5毫克/升+ 土豆汁140克/升+蔗糖25克/升+pH 6.0 ;液体培养条件为，在18摄氏度、转速180转/分钟、光照度1800勒克斯、光照时间4小时/天的条件下，振荡培养15天，种子萌发形成原球茎，见图2B，500粒原球茎鲜重为2.358克，干重为0.246克。
[0026]将得到的原球茎置于分化培养基中，在25摄氏度、光照度2200勒克斯、光照时间10~12小时/天的条件下培养35天，先分化成小芽，再变成具有3片叶的无根小苗；分化培养基组成为:MS培养基+萘乙酸0.5毫克/升+6-苄基嘌呤1.3毫克/升+香蕉汁100~110克/升+蔗糖28克/升+琼脂6克/升+pH5.6。
[0027]将得到的小苗转移到生根培养基中，温度控制在24摄氏度，培养38天后，得到2~3.5厘米高的成苗，见图3 ;其中，所述的生根培养基组成为:1^培养基+萘乙酸2.6毫克/升+蔗糖25克/升+活性炭0.6毫克/升+琼脂7克/升+pH 6。
[0028]将得到的成苗从瓶内取出用清水冲洗去除培养基后，用多菌灵溶液浸泡35分钟，移栽到温室大棚内的栽培基质中；栽培基质为珍珠岩、蛭石与草炭土按体积0.7:2:3组成的混合物；其中珍珠岩粒径5~7 _，蛭石的粒径为3~4 _，草炭土的有机物含量为30% ；培养20天左右，即为生产的种苗。
[0029]实施例3:
将白芨蒴果先用酒精浸泡50秒，再放置于有效氯浓度为0.6%的次氯酸钠水溶液中浸泡12分钟,再用无菌水漂洗3~4次。[0030]将消毒后的蒴果切开，将白芨种子播撒于液体培养基，振荡培养；种子萌发后的生长情况见图1C ;液体培养基组成为:1/4MS培养基+6-苄基嘌呤0.8毫克/升+萘乙酸2.8毫克/升+ 土豆汁150克/升+蔗糖25克/升+pH 5.8 ;液体培养条件为，在18摄氏度、转速230转/分钟、光照度2200勒克斯、光照时间4~5小时/天的条件下，振荡培养20天，种子萌发形成原球茎，见图2C，500粒原球茎鲜重为2.246克，干重为0.231克。
[0031]将得到的原球茎置于分化培养基中，在28摄氏度、光照度2000勒克斯、光照时间10~12小时/天的条件下培养38天，先分化成小芽，再变成具有3片叶的无根小苗；分化培养基组成为:MS培养基+萘乙酸0.8毫克/升+6-苄基嘌呤1.5毫克/升+香蕉汁110克/升+蔗糖3 O克/升+琼脂7克/升+pH5.8。
[0032]将得到的小苗转移到生根培养基中，温度控制在27摄氏度，培养35天后，得到2~3.5厘米高的成苗；其中，所述的生根培养基组成为:MS培养基+萘乙酸3毫克/升+蔗糖30克/升+活性炭0.7毫克/升+琼脂8克/升+pH 6。
[0033]将得到的成苗从瓶内取出用清水冲洗去除培养基后，用多菌灵溶液浸泡50分钟，移栽到温室大棚内的栽培基质中；栽培基质为珍珠岩、蛭石与草炭土按体积0.5:1.8:2.8组成的混合物；其中珍珠岩粒径5~7 _，蛭石的粒径为3~4 _，草炭土的有机物含量为40%;培养20天左右，即为生产的种苗``，见图5。
【权利要求】
1.一种高效快速生产白芨种苗的方法，其特征包括以下步骤: 第一培养阶段， (1)将白芨蒴果先用酒精浸泡30~50秒,再放置于次氯酸钠水溶液中浸泡10~15分钟，再用无菌水漂洗3~4次，将消毒后的蒴果切开，取种子备用； (2)将步骤(1)得到的白芨种子播撒于液体培养基，振荡培养，种子萌发形成原球茎，备用； 第二培养阶段， (3)将步骤(2)得到的原球茎置于分化培养基中，在25~28摄氏度、光照度2000~2500勒克斯、光照时间10~12小时/天的条件下培养30~40天，先分化成小芽，再变成具有3片叶的无根小苗；其中，所述的分化培养基组成为:MS培养基+萘乙酸0.5~0.8毫克/升+6-苄基嘌呤1.3~1.5毫克/升+香蕉汁100~110克/升+蔗糖25~3 O克/升+琼脂6~7克/升+ρΗ5.6~5.8 ; (4)将步骤(3)中得到的小苗转移到生根培养基中，温度控制在24~28摄氏度，培养30~40天后，得到2~3.5厘米高的成苗；其中，所述的生根培养基组成为:MS培养基+萘乙酸2.5~3毫克/升+蔗糖25~30克/升+活性炭0.5~0.8毫克/升+琼脂7-8克/升+pH 6~6.2 ; (5)将步骤(4)得到的成苗从瓶内取出用清水冲洗去除培养基后，用多菌灵溶液浸泡30~60分钟，移栽到温室大棚内的栽培基质中，培养20天左右，即为生产的种苗；所述的栽培基质为珍珠岩、蛭石与草炭土按体积(0.4~0.7) (1.5~2): (2.5~3)组成的混合物。`
2.根据权利要求1所述的高效快速生产白芨种苗的方法，其特征在于，第一培养阶段步骤(1)中，所述的次氯酸钠水溶液中，有效氯浓度为0.3-0.8%。
3.根据权利要求1所述的高效快速生产白芨种苗的方法，其特征在于，第一培养阶步骤(2)的液体培养条件为，在18~24摄氏度、转速180~230转/分钟、光照度1800~2300勒克斯、光照时间4~6小时/天的条件下，振荡培养15~20天，种子萌发形成原球茎。
4.根据权利要求1所述的规模化高效快速生产白芨种苗的方法，其特征在于，第一培养阶步骤(2)中，所述的液体培养基组成为:1/4MS培养基+6-苄基嘌呤0.3-0.8毫克/升+萘乙酸2.5-3.2毫克/升+ 土豆汁120-150克/升+蔗糖25-30克/升+pH 5.8-6.3。
5.根据权利要求1所述的规模化高效快速生产白芨种苗的方法，其特征在于，第二培养阶段步骤(5)中,基质配方是珍珠岩粒径4~7 mm,蛭石的粒径为3~4 mm,草炭土的有机物含量为30%~40%。
【文档编号】A01H4/00GK103814821SQ201410002229
【公开日】2014年5月28日 申请日期:2014年1月3日 优先权日:2014年1月3日
【发明者】孙力军, 张卫明, 姚正颖, 赵伯涛 申请人:中华全国供销合作总社南京野生植物综合利用研究所