蝗虫微孢子雏蝗株系及其应用的利记博彩app
【专利摘要】本发明公开了一种雏蝗微孢子株系及其应用。本发明所提供的雏蝗微孢子株系为雏蝗微孢子（Paranosema?acridophagus）PA-201301，它在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的藏编号为CGMCC?No.7757。本发明所提供的雏蝗微孢子（Paranosema?acridophagus）PA-201301CGMCC?No.7757具有如下优点：对狭翅雏蝗、小翅雏蝗、宽须蚁蝗、短星翅蝗、白边痂蝗、东亚飞蝗和云斑车蝗的致死效果明显大于现有的蝗虫微孢子的致死效果；抗逆性，特别是抗紫外线能力强，孢子溶液经紫外线照射1h，孢子萌发率仍然超过80%；另外，本发明的微孢子生产技术简单，繁殖寄主容易得到，匀浆后，离心力6000g左右分离即可，有助于大量生产和应用。
【专利说明】蝗虫微孢子雏蝗株系及其应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种蝗虫微孢子新株系及其应用，特别涉及一种蝗虫微孢子雏蝗株系及其在防治蝗虫中的应用
【背景技术】
[0002]蝗灾是世界性的自然灾害，对农业生产造成了很大的影响。多年来，蝗灾曾发生过大面积的频繁暴发，包括土蝗、飞蝗、稻蝗、棉蝗和竹蝗。仅飞蝗和土蝗每年分别发生2500万亩次和7000万亩次，严重影响了农牧业生产。
[0003]从20世纪70年代美国采用黑蝗等作为繁殖宿主来培养蝗虫微孢子，随后国内外都陆续开展了蝗虫微孢子的研究。但是现示范应用的蝗虫微孢子是从美国引进的，属于外来物种，应用后有一定生态风险；此外，现有的蝗虫微孢子株系抗逆性较差，特别是抗高温和紫外线能力弱。因此有必要筛选出适用于本土使用且对蝗虫等效果好，抗紫外等能力强的株系，能显著提高防治蝗虫效果且防效稳定。
【发明内容】
[0004]本发明的目的是提供一种雏蝗微孢子株系及其应用。
[0005]本发明所提供的幢虫微孢子雏幢株系(Paranosema acridophagus (Locustae))具体简称为雏幢微孢子(Paranosema acridophagus) PA-201301,是从野外感病狭翅雏虫皇(Chorthippus dubius Zub)中分离筛选得到的，已于2013年6月19日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为:北京市朝阳区北辰西路I号院3号，中国科学院微生物研究所)，保藏`登记号为CGMCC N0.7757。
[0006]所述雏幢微抱子(Paranosemaacridophagus)PA-201301CGMCC N0.7757在如下任一中的应用也属于本发明的保护范围:
[0007](I)防治蝗虫；
[0008](II)制备蝗虫防治剂。
[0009]在本发明中，所述蝗虫具体可为狭翅雏蝗、小翅雏蝗、飞蝗(如东亚飞蝗)、宽须蚁蝗、短星翅蝗、白边痂蝗和云斑车蝗中的至少一种。
[0010]本发明的再一个目的是提供一种蝗虫防治剂。
[0011]本发明所提供的蝗虫防治剂，其活性成分为所述雏蝗微孢子(Paranosemaacridophagus) PA-201301CGMCC N0.7757。
[0012]在本发明中，所述蝗虫防治剂具体为如下(a)或(b):
[0013](a)由所述雏幢微抱子(Paranosema acridophagus) PA-201301CGMCC N0.7757、水和蝗虫引诱剂，按照0.4±0.02亿孢子:1±0.1mL: 30±5 μ g (如0.4亿孢子:ImL: 30 μ g)的比例混合而成的蝗虫防治剂I ;
[0014](b)由所述雏幢微抱子(Paranosema acridophagus)PA-201301CGMCC N0.7757、粒径为1.5-2mm的大麦麸皮和蝗虫引诱剂，按照0.4±0.02亿孢子:10±0.8g: 30±5μ g(如0.4亿孢子:IOg: 30 μ g)的比例混合而成的蝗虫防治剂2。
[0015]其中，所述蝗虫引诱剂为环己醇。
[0016]在本发明中，作为所述蝗虫引诱剂的环己醇具体为百灵威科技有限公司产品，其产品目录号为CAS: 108-93-0。
[0017]在本发明中，所述蝗虫具体可为狭翅雏蝗、小翅雏蝗、飞蝗(如东亚飞蝗)、宽须蚁蝗、短星翅蝗、白边痂蝗和云斑车蝗中的至少一种。
[0018]本发明的还一个目的是提供一种制备所述蝗虫防治剂的活性成分的方法。
[0019]本发明所提供的制备所述蝗虫防治剂的活性成分的方法，具体可包括如下步骤:
[0020](I)将所述雏幢微抱子(Paranosema acridophagus (Locustae))PA-20130ICGMCCN0.7757接种于蝗虫，接种后正常饲喂，直至所述蝗虫死亡；
[0021](2)从死亡虫体中分离得到所述雏幢微孢子(Paranosema acridophagus)PA-201301CGMCC N0.7757，即为所述蝗虫防治剂的活性成分。
[0022]在上述方法中，步骤(I)中，所述“将所述雏幢微孢子(Paranosema acridophagus)PA-201301CGMCC N0.7757接种于蝗虫”的接种量为2 X IO4孢子(如接种20 μ L浓度为I X IO6孢子/mL的孢子液)；所述蝗虫具体可为4-5龄期的蝗虫，更加具体的所述蝗虫可为4-5龄期的狭翅雏蝗、小翅雏蝗、东亚飞蝗、宽须蚁蝗、短星翅蝗、白边痂蝗和云斑车蝗中的至少一种。
[0023]在上述方法中，步骤(I)中，所述饲喂的条件为:温度26_35°C，相对湿度60_70%，光照时间12小时/天。
[0024]在上述方法中，步骤(I)中，所述饲喂为饲喂禾本科植物叶片，如玉米叶片等。
[0025]在上述方法中，步骤(3)中，所述“从死亡虫体中分离得到所述雏蝗微孢子(Paranosema acridophagus) PA-201301CGMCC N0.7757” 具体可通过如下方法实现:将所述死亡虫体的腹部匀浆(如放入匀浆器内匀浆)，用40-60目的滤网过滤(如用40-60目的医用尼龙纱网过滤)，用6000g-8000g的离心力离心12分钟，取沉淀，即为所述雏蝗微孢子(Paranosema acridophagus) PA-201301CGMCC N0.7757。
[0026]本发明的又一个目的是提供一种蝗虫防治方法。
[0027]本发明所提供的蝗虫防治方法，是使用所述蝗虫防治剂对蝗虫进行防治。
[0028]在所述方法中，当采用所述蝗虫防治剂I对蝗虫进行防治时，所述蝗虫防治剂I的用量为:每亩植物施用10-12.5mL (如12.5mL)所述蝗虫防治剂I。
[0029]在所述方法中，当采用所述蝗虫防治剂2对蝗虫进行防治时，所述蝗虫防治剂2的用量为:每亩防治区施用100-125g (如125g)所述蝗虫防治剂2。
[0030]在上述方法中，所述蝗虫可为狭翅雏蝗、小翅雏蝗、宽须蚁蝗、短星翅蝗、白边痂蝗、东亚飞蝗和云斑车蝗中的至少一种。
[0031 ] 在本发明中，所述防治区为草地、林地或农田等。
[0032]与现有技术相比，本发明所提供的雏幢微孢子(Paranosema acridophagus)PA-201301CGMCC N0.7757具有如下优点:对蝗虫的致死效果明显大于现有的蝗虫微孢子株系的致死效果；抗逆性，特别是抗紫外线能力强，孢子溶液经紫外线照射lh，孢子萌发率仍然超过80% ;另外，本发明的微孢子生产技术简单，繁殖寄主容易得到，匀浆后，离心力6000g左右分离即可，有助于大量生产和应用。本发明的社会及经济效益如下:1、经济效益:在本发明的基础上可生广出闻效无害有机农药，减少残留，提供绿色食品。本发明有利于加快微孢子防蝗生物制剂的开发应用进程，完善应用技术，在近几年内可开发出适于大面积推广应用的纯生物制剂并实现产业化生产，能产生巨大经济效益。2、生态效益:本发明所提供的防蝗微孢子制剂属于纯天然生物制剂，害虫对其不易产生抗药性，对害虫天敌没有杀伤作用，对高等动物无害，不污染环境，能保护生态平衡，具有较好的生态效益。3、社会效益:本发明能大大促进防蝗微孢子制剂的开发应用和草原植被恢复，促进地区畜牧业的发展和农牧民生活水平的提高，具有很大的社会效益。在贫瘠地区建立微孢子防蝗示范区，可帮助农牧民脱贫致富，其社会效益十分显著。并解决一部分人员的就业问题，对维护社会的稳定和经济发展，提高当地人民生活水平，具有巨大的社会和经济效益。
[0033]保藏说明
[0034]微孢子:雏蝗微孢子
[0035]拉丁名:(Paranosemaacridophagus)
[0036]菌株编号:PA-201301 [0037]保藏机构:中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心
[0038]保藏机构简称:CGMCC
[0039]地址:北京市朝阳区北辰西路I号院3号
[0040]保藏日期:2013年06月19日
[0041]保藏中心登记入册编号:CGMCC N0.7757
【专利附图】
【附图说明】
[0042]图1 为雏蝗微孢子(Paranosema acridophagus)PA-201301CGMCC N0.7757 的培育
工艺流程图。
[0043]图 2 为雏蝗微孢子(Paranosema acridophagus)PA-201301CGMCC N0.7757 在不同
寄主中的增殖效果比较。
[0044]图3为不同微孢子株系对不同蝗虫的毒力测定结果。其中，“雏蝗微孢子”即为雏虫皇微抱子(Paranosema acridophagus) PA-201301CGMCC N0.77570
[0045]图4为不同微孢子株系对不同蝗虫的感染能力测定结果。其中，“雏蝗微孢子”即为雏幢微抱子(Paranosema acridophagus) PA-201301CGMCC N0.7757。
[0046]图5为不同微孢子株系的紫外稳定性检测结果。其中，“雏蝗微孢子”即为雏蝗微抱子(Paranosema acridophagus) PA-201301CGMCC N0.7757。
[0047]图6为蝗虫防治剂的对蝗虫的草地防治效果。
【具体实施方式】
[0048]下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0049]下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0050]下述实施例中所涉及的几种现有微孢子如下:
[0051]幢虫微孢子虫东亚飞幢株系(Nosema 1custae),简称飞幢微孢子:从感病的东亚飞蝗体内分离纯化得到(王丽英，曹春.我国蝗虫微孢子虫超显微结构与致病特性研究.草地学报，1994年01期)。[0052]家蚕微孢子虫(Nosema bombycis):从感病的家蚕体内分离纯化得到(周成，潘国庆，万永继等.家蚕微孢子虫N.bombycis分离纯化方法的优化.蚕学通讯，2002年01期)。
[0053]实施例1、雏幢微孢子(Paranosema acridophagus) PA-201301的获得及鉴定
[0054]一、雏幢微抱子(Paranosema acridophagus)株系 PA-201301 的获得
[0055]将从青藏高原野外采集到的感病的雏蝗等进行解剖，检测被微孢子感染情况，将肠道放入匀浆器内匀浆，用医用尼龙纱网(40-60目)过滤，用6000g-8000g的离心力离心12分钟，得到不同微孢子株系。将其中一株分离自狭翅雏蝗的微孢子株系记为PA-201301株系O
[0056]二、雏幢微抱子(Paranosema acridophagus)株系 PA-201301 的鉴定
[0057]在微孢子的系统分类上，孢子的形态、大小、病原性、极丝圈数和极丝角等特征是鉴别的主要特征，本发明的发明人比较测试了步骤一获得的PA-201301株系与当前的不同种(株)微孢子(见表I)形态和大小、病原性、极丝圈数和极丝角等特性，
[0058]以确定步骤一获得的PA-201301株系是否是一个新的株系。
[0059]1、孢子形态和大小的测定
[0060]使用通用的显微测微计测定分析如下:
[0061]表I不同种(株)微孢子形态和大小
[0062]
【权利要求】
1.雏幢微孢子(Paranosemaacridophagus)PA_201301,它在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的藏编号为CGMCC N0.7757。
2.权利要求1 所述雏幢微抱子(Paranosema acridophagus)PA-201301CGMCC N0.7757在如下任一中的应用: (I)防治蝗虫； (II)制备蝗虫防治剂。
3.—种蝗虫防治剂，其特征在于:所述蝗虫防治剂的活性成分为权利要求1所述的雏虫皇微抱子(Paranosema acridophagus) PA-201301CGMCC N0.77570
4.根据权利要求3所述的蝗虫防治剂，其特征在于:所述蝗虫防治剂为如下(a)或(b): Ca)由权利要求1 所述的雏幢微抱子(Paranosema acridophagus) PA-201301CGMCCN0.7757、水和蝗虫引诱剂，按照0.4±0.02亿孢子:1±0.ImL: 30±5μ g的比例混合而成的蝗虫防治剂I ; (b)由权利要求1 所述的雏幢微抱子(Paranosema acridophagus) PA-201301CGMCCN0.7757、粒径为1.5-2mm的大麦麸皮和蝗虫引诱剂，按照0.4 + 0.02亿孢子:10±0.8g: 30±5μ g的比例混合而成的蝗虫防治剂2。
5.根据权利要求4所述的`蝗虫防治剂，其特征在于:所述蝗虫引诱剂为环己醇。
6.制备权利要求3-5中任一所述蝗虫防治剂的活性成分的方法，包括如下步骤: (1)将权利要求1所述雏幢微抱子(Paranosema acridophagus)PA-201301CGMCCN0.7757接种于蝗虫，接种后正常饲喂，直至所述蝗虫死亡； (2)从死亡虫体中分离得到权利要求1所述雏幢微孢子(Paranosemaacridophagus)PA-201301CGMCC N0.7757，即为权利要求3或4所述蝗虫防治剂的活性成分。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于:步骤(I)中，将权利要求1所述雏蝗微抱子(Paranosema acridophagus) PA-201301CGMCC N0.7757 接种于所述幢虫的接种量为2X IO4孢子;或 所述蝗虫为4-5龄期蝗虫。
8.根据权利要求6或7所述的方法，其特征在于:步骤(I)中，所述饲喂的条件为:温度26-35°C，相对湿度60-70%，光照时间12小时/天。
9.一种蝗虫防治方法，为使用权利要求3-5中任一所述蝗虫防治剂对蝗虫进行防治。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于:在所述方法中，当采用所述蝗虫防治剂I对蝗虫进行防治时，所述蝗虫防治剂I的用量为:每亩防治区施用10-12.5mL所述蝗虫防治剂I ;或 在所述方法中，当采用所述蝗虫防治剂2对蝗虫进行防治时，所述蝗虫防治剂2的用量为:每亩防治区施用100-125g所述蝗虫防治剂2。
【文档编号】A01P7/04GK103451100SQ201310381475
【公开日】2013年12月18日 申请日期:2013年8月28日 优先权日:2013年8月28日
【发明者】张英霞 申请人:河北晟普生物科技有限公司