专利名称：刺五加的组织培养繁育方法
技术领域：
本发明涉及一种药用植物的繁育方法，特别是一种刺五加的组织培养繁育方法。
背景技术：
刺五加为五加科五加属灌木，根、茎、叶、皮、果实均可人药。刺五加具有调节机体紊乱，补中、益精、强意志、祛风湿、壮筋骨、活血去瘀、健胃利尿等功能。刺五加中的重要成分刺五加甙为良好的强壮剂，可增加肌体的防御功能，有抗疲劳和防止记忆衰退等功效。以刺五加为原料的药品和食品深受国内外的欢迎，但近二十年来掠夺式的采挖，使野生刺五加资源遭到严重破坏，天然资源趋于枯竭。而常规的刺五加栽培手段存在着种子处理难度大、发芽率低，扦插生根率低，培育周期长的弊端
发明内容
为了克服现有刺五加人工栽培技术中的不足，本发明提供一种刺五加组织培养的繁育方法，不仅能够提高刺五加的出苗率，而且能够缩短培育周期。本发明所采用的技术方案是刺五加的组织培养繁育方法，其特征是该方法包括如下步骤
(O培养基制备选择MS培养基作为基本培养基，6-苄氨基嘌呤(6-BA)、萘乙酸(NAA)、玉米素(ZT)和3-吲哚乙酸(IAA)作为调控激素分别制备三种培养基
初分化培养基 A MS+6-BA0. 8 I. 2mg/L+NAA0. Γθ. 5mg/L,
继代分化培养基 B MS+6-BA0. 5 I. 5mg/L+ ZTO. I lmg/L，
生根培养基 C MS +NAA0. Γ . Omg/L+IAAO. Γθ. 5mg/L,
培养基A和B中均附加2(T35g/L蔗糖和r5g/L琼脂，培养基C附加15 25g/L蔗糖和l 2g/L琼脂，用I 2mol/L的NaOH和HCL调节pH值至5. 8 6. O,并将培养基A、B和C在高压蒸汽灭菌锅O. Γθ. 15MPa, 120 125°C灭菌15 20min ；
(2)外植体的消毒选用刺五加刚萌发的嫩芽作为外植体，用自来水冲洗3(T60min，在无菌操作台上用70%酒精消毒2 4min，用无菌水冲洗3 4次，在解剖镜下去掉芽的鳞片，再用浓度为O. 059Γ0. 1%的升汞消毒7 15min，最后用无菌水冲洗4 6次；
(3)外植体的诱导将步骤(2)消毒的刺五加外植体接种在初分化培养基A上，接种瓶内每瓶放f 3个外植体，置于培养室内培养3(Γ60天，外植体长出不定芽；
(4)继代芽的分化将步骤(3)中初分化完成的外植体转接入继代分化培养基B中，置于培养室内培养2(Γ40天，外植体分化出丛芽；
(5)继代芽的生根将高度为I.5^2. Ocm左右、健壮的继代单芽转接入生根培养基C中，进行生根培养，3(Γ40天后根长达2 4cm，生根率达90%以上，具备独立从土壤、基质中吸收营养元素的能力；
(6)炼苗及移栽把接种瓶瓶口打开在培养室内散射光下炼苗5 7天，光照周期为16h/d，光照强度为200(T2400Lux，培养室温度为23 25°C ;之后取出瓶内的组培苗，用自来水洗净根部的琼脂，再用蒸馏水稀释成50(Γ600倍的多菌灵浸泡组培苗根部2(T30min，移栽至以蛭石、珍珠岩和腐殖土为混合基质的营养杯中，将营养杯放到人工气候箱中，光照周期为16h/d，光照强度为200(T2400Lux，白天23 25°C，晚上15 18°C，保持湿度40 60%，隔两周浇一次1/15 1/10MS母液，30 40天后移栽到大棚中，成活率达95%以上。步骤(3) 步骤(5)中，培养条件为光照周期16h/d，光照强度200(T2400Lux，培养温度23 25°C。步骤(6)中，所述混合基质中蛭石珍珠岩腐殖土的质量比为2:1:3，并且该混合基质需在压力O. Γ0. 15MPa、温度120 125°C条件下灭菌15 20min。1/15 1/10MS培养基母液的成分与MS培养基相同，将MS培养基母液稀释10 15
倍。 本发明的有益效果本发明利用组织培养技术在短时间内既能大规模扩大植株的繁殖量，并且使亲本的优良性状得以保存；利用组织培养进行刺五加的无性快速繁殖，取材少，培养经济；可人为控制培养条件，不受自然条件影响，跳出了植物生长环境、地域以及季节时间的限制；生长周期短，繁殖率高，能在较短的时间内繁育出大量的刺五加组培苗，缩短了刺五加的生长周期。
具体实施例方式下面结合具体实例对本发明作进一步说明。刺五加的组织培养繁育方法，包括以下步骤
(O培养基制备选择MS培养基作为基本培养基，6-苄氨基嘌呤(6-BA)、萘乙酸(NAA)、玉米素(ZT)和3-吲哚乙酸(IAA)作为调控激素分别制备三种培养基初分化培养基 A MS+6-BAl. Omg/L+NAAO. lmg/L,继代分化培养基 B MS+6-BA0. 5mg/L+ ZTO. 2mg/L,生根培养基C MS +NAAO. 5mg/L+IAA0. lmg/L ;培养基A和B中均附加30g/L蔗糖和4g/L琼脂，培养基C附加15g/L蔗糖和2g/L琼脂，用lmol/L的NaOH和HCL调节pH值至6. 0，并将培养基A、B和C在高压蒸汽灭菌锅0. 15MPa, 125°C灭菌20min。(2)外植体的消毒选用刺五加刚萌发的嫩芽作为外植体，用自来水冲洗30min,在无菌操作台上用70%酒精消毒3min，用无菌水冲洗4次，在解剖镜下去掉芽的鳞片，再用浓度为0. 05%的升萊消毒15min,最后用无菌水冲洗6次。(3)外植体的诱导将步骤(2)消毒的刺五加外植体接种在初分化培养基A上，接种瓶内每瓶放I个外植体，置于培养室内培养40天，外植体长出不定芽；培养条件为光照周期16h/d，光照强度2000Lux，培养室温度23 25°C。(4)继代芽的分化将步骤(3)中初分化完成的外植体转接入继代分化培养基B中，置于培养室内培养30天,外植体分化出丛芽；培养条件为光照周期16h/d,光照强度2000Lux,培养室温度23 25°C。(5)继代芽的生根将高度为2cm左右、健壮的继代单芽转接入生根培养基C中，进行生根培养，40天后根长达3cm ;培养条件为光照周期16h/d，光照强度2000Lux，培养室温度23 25°C。(6)炼苗及移栽把接种瓶瓶口打开在培养室内散射光下炼苗5天，光照周期为16h/d，光照强度为2000LUX，培养室温度为23 25°C;之后取出瓶内的组培苗，用自来水洗净根部的琼脂，再用蒸馏水稀释成500倍的多菌灵浸泡组培苗根部20min，移栽至以蛭石、珍珠岩和腐殖土为混合基质的营养杯中，将营养杯放到人工气候箱中，光照周期为16h/d,光照强度为2000LUX，白天23 25°C，晚上15 18°C，保持湿度50%，隔两周浇一次1/12MS母液，30天后移栽到大棚中。·
权利要求
1.刺五加的组织培养繁育方法，其特征在于包括以下步骤 (O培养基制备选择MS培养基作为基本培养基，6-苄氨基嘌呤(6-BA)、萘乙酸(NAA)、玉米素(ZT)和3-吲哚乙酸(IAA)作为调控激素分别制备三种培养基初分化培养基 A MS+6-BA0. 8 I. 2mg/L+NAA0. Γθ. 5mg/L,继代分化培养基 B MS+6-BA0. 5 I. 5mg/L+ ZTO. I lmg/L，生根培养基 C MS +NAA0. Γ . Omg/L+IAAO. Γθ. 5mg/L, 培养基A和B中均附加2(T35g/L蔗糖和r5g/L琼脂，培养基C附加15 25g/L蔗糖和l 2g/L琼脂，用I 2mol/L的NaOH和HCL调节pH值至5. 8 6. O,并将培养基A、B和C在高压蒸汽灭菌锅O. Γθ. 15MPa, 120 125°C灭菌15 20min ； (2)外植体的消毒选用刺五加刚萌发的嫩芽作为外植体，用自来水冲洗3(T60min，在无菌操作台上用70%酒精消毒2 4min，用无菌水冲洗3 4次，在解剖镜下去掉芽的鳞片，再用浓度为O. 059Γ0. 1%的升汞消毒7 15min，最后用无菌水冲洗4 6次； (3)外植体的诱导将步骤(2)消毒的刺五加外植体接种在初分化培养基A上，接种瓶内每瓶放f 3个外植体，置于培养室内培养3(Γ60天，外植体长出不定芽； (4)继代芽的分化将步骤(3)中初分化完成的外植体转接入继代分化培养基B中，置于培养室内培养2(Γ40天，外植体分化出丛芽； (5)继代芽的生根将高度为I.5^2. Ocm左右、健壮的继代单芽转接入生根培养基C中，进行生根培养，30^40天后根长达2 4cm ； (6)炼苗及移栽把接种瓶瓶口打开在培养室内散射光下炼苗5 7天，光照周期为16h/d，光照强度为200(T2400Lux，培养室温度为23 25°C ;之后取出瓶内的组培苗，用自来水洗净根部的琼脂，再用蒸馏水稀释成50(Γ600倍的多菌灵浸泡组培苗根部2(T30min，移栽至以蛭石、珍珠岩和腐殖土为混合基质的营养杯中，将营养杯放到人工气候箱中，光照周期为16h/d，光照强度为200(T2400Lux，白天23 25°C，晚上15 18°C，保持湿度40 60%，隔两周浇一次1/15 1/10MS母液，30 40天后移栽到大棚中。
2.如权利要求I所述刺五加的组织培养繁育方法，其特征是步骤(3) 步骤(5)中，培养条件为光照周期16h/d，光照强度200(T2400Lux，培养温度23 25°C。
3.如权利要求I所述刺五加的组织培养繁育方法，其特征是步骤(6)中，所述混合基质中蛭石珍珠岩腐殖土的质量比为2:1:3，并且该混合基质需在压力0. Γθ. 15MPa、温度120 125°C条件下灭菌15 20min。
4.如权利要求I所述刺五加的组织培养繁育方法，其特征是1/15 1/10MS培养基母液的成分与MS培养基相同，将MS培养基母液稀释1(Γ15倍。
全文摘要
本发明涉及一种刺五加的组织培养繁育方法，包括以下步骤(1)MS培养基作为基本培养基，6-BA、NAA、ZT和IAA作为调控激素；(2)刺五加刚萌发的嫩芽作为外植体，消毒；(3)将刺五加外植体接种在初分化培养基上，长出不定芽；(4)将长出不定芽的外植体转接入继代分化培养基中；(5)将继代分化完成的外植体转接入生根培养基中；(6)将接种瓶口打开炼苗，取出组培苗，移栽至混合基质营养杯中，经过一段时间培养，移栽至大棚中，成活率达93%~97%。本发明取材少，培养经济，可人为控制培养条件，不受自然条件影响，生长周期短，繁殖率高，保证了刺五加的品质。
文档编号A01H4/00GK102845306SQ20121030952
公开日2013年1月2日 申请日期2012年8月28日 优先权日2012年8月28日
发明者程钰翔 申请人:程钰翔