专利名称：具有免疫增强活性和抗病毒功效的植物多糖硫酸酯化物的制备方法及应用的利记博彩app
技术领域：
本发明涉及ー种具有免疫增强活性和抗病毒功效的植物多糖硫酸酷化物的制备方法及应用，具体涉及ー种具有增强免疫活性、抗病毒活性的生物饲料添加剂川明參多糖硫酸酷化物及其制备方法及应用。
背景技术：
药物饲料添加剂由于其具有促进畜禽生长和预防疾病等作用，提高了生产率和饲养经济效益，在我国畜禽养殖业中起着重要作用。然而，随着药物饲料添加剂的长期使用，尤其是抗生素、化学合成药物在饲料中的滥用，出现了耐药性、药物残留、环境污染等问题。这不仅降低了畜产品的质量，还会通过生物链影响到人类健康和生态平衡。随着我国加入 WTO后国际市场化的步伐加快，以及人们对生活质量要求的提高，发展无公害畜牧业，生产緑色畜产品已成为我国政府畜牧主管部门的首要任务，寻找緑色、安全、高效的饲料添加剂替代抗生素、化学药物等的无公害绿色饲料添加剂成为加快我国畜禽业可持续发展的当务之急。中药多糖是中药的主要活性成分之一，其生物活性近年来受到广泛关注，研究表明其既具有资源丰富，安全低毒，无污染，无残留等优点，又具有抗肿瘤、抗氧化、抗糖尿病、抗病毒、抗辐射、调节免疫、调血脂等功能。然而植物多糖自身不具有某些生物活性或生物活性很弱，因而限制了其应用。如何利用现有的科学技术手段改造多糖以提高其生物活性已成为ー个重要问题。
发明内容
鉴于植物多糖的上述不足，本发明通过大量的研究和实践，提供ー种具有免疫增强活性和抗病毒功效的植物多糖硫酸酯化物的制备方法及应用。为了提高植物多糖的生物活性，本发明采用了以下技术方案ー种具有免疫增强活性和抗病毒功效的植物多糖硫酸酷化物的制备方法，提取和精制中药川明參中多糖，然后在川明參多糖中添加酷化试剂制备成川明參多糖硫Ife酷化物。所述川明參多糖的制备方法如下川明參干燥粉末置于索式提取器中，用I : UV/V)的こ醇、こ醚混合液加热回流脱脂2 6h，过滤后药渣置于室温下干燥。将蒸馏水按料液比I 10 20 (g/ml)加入药渣中，80 100°C提取3次，每次I 3h，合并提取液，浓缩至最小体积，用流水透析24 48h后蒸馏水透析12 24h，透析袋内加入体积为提取液1/5的三氯甲烷，随后再加入体积为三氯甲烷1/5的正丁醇，剧烈振摇10 20min，离心去除水层与有机层交界处的变性蛋白质，水层仍按照此方法反复除蛋白3 5次。浓缩后加入I 3倍量95%こ醇(V/V)静置过夜。离心收集沉淀，依次用无水こ醇、丙酮洗涤后，离心分离，沉淀物置于30 40°C真空干燥得川明參多糖。所述川明參多糖硫酸酷化物的制备方法如下
(I)酷化试剂的制备将氯磺酸与吡啶按按照I : 6 I : 10的体积比，在冰盐浴以及不断搅拌下，逐滴加入到预冷的50mL无水吡啶中，其中氯磺酸应在20 30min内滴加完毕；(2)均匀分布于无水甲酰胺的川明參多糖的制备将100 300mg川明參多糖边搅拌边加入到10 20mL无水甲酰胺中，继续搅拌20 30min使川明參多糖在无水甲酰胺中均匀分布；(3)将酯化试剂加入到含有川明參多糖的无水甲酰胺溶液中，在40 60°C水浴温度下搅拌反应I 2h。反应完毕后，冷却至室温，再加入15% NaOH溶液调pH值至7. O 8. 0，流水透析48 72h后蒸馏水透析12 24h。こ醇沉淀，丙酮、无水こ醚分别洗涤，真空干燥12 24h后得到川明參多糖硫酸酷化物。 所述的具有免疫增强活性和抗病毒功效的植物多糖硫酸酷化物的应用，作为ー种抗病、促生长和无残留的生物饲料添加剂用于畜禽。本发明中的多糖硫酸酷化物主要通过氯化钡一明胶法測定其硫酸取代度。本发明经药效学研究表明，川明參多糖硫酸酷化物具有增强免疫活性和抗病毒活性。
具体实施例方式以下结合具体实施例，对本发明进行详细说明。实施例I川明參多糖的制备称取300g的川明參干燥粉末置于索式提取器中，用I : 1(V/V)的こ醇、こ醚混合液加热回流脱脂6h，过滤后药渣置于室温下干燥。将蒸馏水按料液比I 20 (g/ml)加入药渣中，100°C提取3次，每次3h，合并提取液，浓缩至小体积，用流水透析48h后蒸馏水透析24h，透析袋内液体积为提取液1/5的三氯甲烷，随后再加入体积为三氯甲烷1/5的正丁醇，剧烈振摇20min，离心除去水层与有机层交界处的变性蛋白质，水层仍按照此方法反复除蛋白5次。浓缩后加入3倍量95%こ醇(V/V)静置过夜。离心收集沉淀，依次用无水こ醇、丙酮洗涤后，离心分离，沉淀物置于40°C真空干燥得川明參多糖。制备酯化试剂氯磺酸与吡啶I : 6的体积比(V/V)，在冰盐浴以及不断搅拌下，将氯磺酸逐滴加入到预冷的50mL无水吡啶中；将300mg川明參多糖边搅拌边加入到20mL无水甲酰胺中，继续搅拌30min使多糖在无水甲酰胺中分布均匀；然后加入酷化试剂，在60°C水浴温度下搅拌反应2h。反应完毕后，冷却至室温，再加入质量百分浓度为15% NaOH溶液调pH值至7. 0-8. 0，流水透析72h后蒸馏水透析24h。こ醇沉淀，丙酮、无水こ醚分别洗涤，真空干燥24h后得到川明參多糖硫酸酷化物。经氯化钡一明胶法測定其硫酸取代度为1.37。实施例2川明參多糖的制备称取200g的川明參干燥粉末置于索式提取器中，用I : 1(V/V)的こ醇、こ醚混合液加热回流脱脂4h，过滤后药渣置于室温下干燥。将蒸馏水按料液比I 15 (g/ml)加入药渣中，90°C提取2次，每次2h，合并提取液，浓缩至小体积，用流水透析36h后蒸馏水透析18h，透析袋内液加入体积为提取液1/5的三氯甲烷，随之再加入体积为三氯甲烷1/5的正丁醇，剧烈振摇15min，离心除去水层与有机层交界处的变性蛋白质，水层仍按照此方法反复除蛋白3次。浓缩后加入2倍量95%こ醇(V/V)静置过夜。离心收集沉淀，依次用无水こ醇、丙酮洗涤后，离心分离，沉淀物置于35°C真空干燥得川明參多糖。制备酯化试剂氯磺酸按与吡啶I : 8的体积比(V/V)，在冰盐浴以及不断搅拌下，将氯磺酸逐滴加入到预冷的50mL无水吡啶中；将300mg川明參多糖边搅拌边加入到20mL无水甲酰胺中，继续搅拌30min使多糖在无水甲酰胺中分布均匀；然后加入酷化试剂，在60°C水浴温度下搅拌反应2h。反应完毕后，冷却至室温，再加入质量百分浓度为15% NaOH溶液调pH值至7. 0-8. 0，流水透析72h后蒸馏水透析24h。こ醇沉淀，丙酮、无水こ醚分别洗涤，真空干燥24h后得到川明參多糖硫酸酷化物。经氯化钡一明胶法測定其硫酸取代度为O. 95。实施例3川明參多糖的制备称取IOOg的川明參干燥粉末置于索式提取器中，用I : 1(V/V)的こ醇、こ醚混合液加热回流脱脂4h，过滤后药渣置于室温下干燥。将蒸馏水按料液比 I 10加入药渣中，100°C提取2次，每次I. 5h，合并提取液，浓缩至小体积，用流水透析24h后蒸馏水透析12h，透析袋内液加入体积为提取液1/5的三氯甲烷，随之再加入体积为三氯甲烷1/5的正丁醇，剧烈振摇lOmin，离心分去水层与有机层交界处的变性蛋白质，水层仍按照此方法反复除蛋白4次。浓缩后加入I. 5倍量95%こ醇(V/V)静置过夜。离心收集沉淀，依次用无水こ醇、丙酮洗涤后，离心分离，沉淀物置于40°C真空干燥得川明參多糖。制备酯化试剂氯磺酸按与吡啶I : 10的体积比(V/V)，在冰盐浴以及不断搅拌下，将氯磺酸逐滴加入到预冷的50mL无水吡啶中；将300mg川明參多糖边搅拌边加入到20mL无水甲酰胺中，继续搅拌30min使多糖在无水甲酰胺中分布均匀；然后加入酷化试剂，在60°C水浴温度下搅拌反应2h。反应完毕后，冷却至室温，再加入质量百分浓度为15% NaOH溶液调pH值至7. 0-8. O,流水透析72h后蒸馏水透析24h。こ醇沉淀，丙酮、无水こ醚分别洗涤，真空干燥24h后得到川明參多糖硫酸酷化物。经氯化钡一明胶法測定其硫酸取代度为O. 69。实施例4川明參多糖硫酸酷化物对新城疫免疫雏鸡的免疫增强活性研究本试验采用I日龄三黄鸡200羽，随机平均分为四组，包括川明參多糖硫酸酷化物高、中、低剂量组和对照组，各组的试验鸡于7日龄时(HI低于31og2，平均体重120g)通过点眼滴鼻进行新城疫活疫苗免疫。高、中、低剂量组的鸡只分别按照100mg/kg.d、50mg/kg. d、25mg/kg. d的剂量ロ服给予O. 5ml川明參多糖硫酸酷化物，对照组则ロ服O. 5ml的生理盐水，连续5d。于14、21、28日龄时测定其血清抗体滴度、淋巴细胞増殖、红细胞玫瑰花环率和红细胞免疫复合物花环率的測定。结果表明川明參多糖硫酸酷化物能显著增强雏鸡血清中抗体的水平并且能维持较长时间(见表I);显著提高T淋巴细胞的増殖(见表2);显著提高鸡红细胞玫瑰花环率(见表3)，提高其清除免疫复合物的速率(见表4)。表I川明參多糖硫酸酯化物对鸡血清抗体的影响
权利要求
1.ー种具有免疫增强活性和抗病毒功效的植物多糖硫酸酷化物的制备方法，其特征在干提取和精制中药川明參中多糖，然后在川明參多糖中添加酯化试剂制备成川明參多糖硫酸酯化物。
2.根据权利要求I所述的制备方法，其特征在于所述川明參多糖的制备方法如下川明參干燥粉末置于索式提取器中，用I : I (V/V)的こ醇、こ醚混合液加热回流脱脂2 .6h,过滤后药洛置于室温下干燥。将蒸懼水按料液比I : 10 20 (g/ml)加入药洛中，80 .100°C提取3次，每次I 3h，合并提取液，浓缩至最小体积，用流水透析24 48h后蒸馏水透析12 24h，透析袋内加入体积为提取液1/5的三氯甲烷，随后再加入体积为三氯甲烷.1/5的正丁醇，剧烈振摇10 20min，离心去除水层与有机层交界处的变性蛋白质，水层仍按照此方法反复除蛋白3 5次。浓缩后加入I 3倍量95%こ醇(V/V)静置过夜。离心收集沉淀，依次用无水こ醇、丙酮洗涤后，离心分离，沉淀物置于30 40°C真空干燥得川明參多糖。
3.根据权利要求I所述的制备方法，其特征在于所述川明參多糖硫酸酷化物的制备方法如下 (1)酷化试剂的制备将氯磺酸与吡啶按按照I: 6 I : 10的体积比，在冰盐浴以及不断搅拌下，逐滴加入到预冷的无水吡啶中，其中氯磺酸应在20 30min内滴加完毕； (2)均匀分布于无水甲酰胺的川明參多糖的制备将川明參多糖边搅拌边加入到无水甲酰胺中，继续搅拌20 30min使川明參多糖在无水甲酰胺中均匀分布； (3)将酯化试剂加入到含有川明參多糖的无水甲酰胺溶液中，在40 60°C水浴温度下搅拌反应I 2h。反应完毕后，冷却至室温，再加入15% NaOH溶液调pH值至7. O 8. 0，流水透析48 72h后蒸馏水透析12 24h。こ醇沉淀，丙酮、无水こ醚分别洗涤，真空干燥.12 24h后得到川明參多糖硫酸酷化物。
4.根据权利要求1-3任一所述的方法制备的植物多糖硫酸酯化物的应用，作为ー种抗病、促生长和无残留的生物饲料添加剂用于畜禽。
全文摘要
本发明公开了一种具有免疫增强活性和抗病毒功效的植物多糖硫酸酯化物及其制备方法。其制备方法为从中药川明参中提取和精制多糖，然后将川明参多糖均匀分布于无水甲酰胺中，加入酯化试剂，在一定的温度下制成川明参多糖硫酸酯化物。所制备的川明参多糖硫酸酯化物具有免疫增强活性以及体外抗新城疫病毒、鸭瘟病毒活性，可作为一种抗病、促生长和无残留的生物饲料添加剂在畜禽中使用。
文档编号A23K1/16GK102690366SQ20121019142
公开日2012年9月26日 申请日期2012年6月11日 优先权日2012年6月11日
发明者宋旭, 徐娇, 殷中琼, 程安春, 贾仁勇 申请人:殷中琼