专利名称：甜樱桃砧木Colt组织培养方法
技术领域：
本发明属于植物组织培养技术领域，具体是一种通过植物组织培养技术繁殖甜樱桃砧木Colt的方法。
背景技术：
甜樱桃砧木Colt从英国东茂林试验站引入，由马扎德与中国樱桃杂交育成，为英国优良樱桃砧木，适合大面积樱桃园丰产栽培使用，该砧木根系发达，适应性强，抗旱，固定性好，植株分枝多，呈丛状生长，嫁接亲和力强，苗木生长健壮，定植建园园相整齐，植株生长结果性状良好，具有较好的丰产性和稳产性，通过与不同樱桃品种嫁接生长调查，各品种均表现出良好的亲和力且性状稳定，在栽培管理中抗病害、树体生长旺盛、早果丰产、园象整齐等，表现出良好的栽培效果，具有广阔的发展市场前景。近几十年来，随着国内外生物工程技术的不断进步和完善，其在果树花卉产业方面的应用也越来越广泛，这不仅极大地促进果树花卉产业的蓬勃发展，也给各地相关产业注入了生机与活力。特别是利用生物工程技术方法之一的植物组织培养快速繁殖技术，对名优新优果树花卉苗木的繁殖，显示了强大的发展前景，许多名贵、优良、稀有和新育成的品种，通常因用常规方法难以迅速大量繁殖，或者繁殖率极低，不能及时满足生产和市场的需求，在一定程度上困扰着果树花卉产业的迅速发展和产业水平的提升。而运用生物工程技术进行快速繁殖，具有周年生产、繁殖系数高、遗传性状相对稳定等特点，对保存无性系种质资源，大批量生产无病毒苗木，降低苗木生产成本等具有现实意义。在现有技术中，甜樱桃砧木Colt组培苗扩繁系数低，生根困难，移栽成活率低使其一直无法实现大规模工厂化生产。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种甜樱桃砧木Colt的组织培养方法。本发明的技术方案是:一种甜樱桃砧木Colt组织培养方法，它包括以下步骤:(I)初代培养春萌芽前选取一年生甜樱桃砧木Colt枝剪成2厘米长带芽段，分别用害立平溶液、HgCl2溶液消毒后，剥开该带芽段越冬芽磷片切取茎尖，接种于初代培养基上培养，所述初代培养基为1/2MS加入下述的原料及其配方比例:白砂糖25g琼脂粉5g 6-苄氨基嘌呤0.5 2.0mg吲哚丁酸0.01 0.10mg，培养条件:温度20 28°C，光照强度2000 2800Lx、光照时间10 12小时/天，湿度40 70%; (2)继代培养将步骤(I)中初代培养的丛生茎尖转接到增殖培养基中培养，该增殖培养基为在I升1/2MS基本培养基中加入下述原料及其配比制成:白砂糖25g琼脂粉5g 6-节氨基嘌呤1.0 1.5mg卩引哚丁酸0.15
0.20mg，培养条件为:温度为20 28°C，光照强度2000 2800Lx、光照时间10 12小时/天，湿度为40% 70% ；(3)生根培养将 步骤(2)中增殖培养的茎尖接入生根培养基中培养，该生根培养基为在I升1/2MS基本培养基中加入下述原料及其配比制成:白砂糖25g琼脂粉5g吲哚丁酸0.25 0.75mg,培养条件为:温度20 28°C，湿度40 70 %，光照强度2000 2800Lx，光照时间10 12小时/天；(4)炼苗培养和移栽包括如下环节:闭瓶锻炼、开瓶锻炼、移栽到蛭石基质、移栽到由细砂石、田园土、牛粪组成的营养土中。优选的，所述初代培养基为在I升1/2MS基本培养基中加入下述原料及其配比制成:白砂糖25g琼脂粉5g 6-苄氨基嘌呤1.0mg吲哚丁酸0.1mg ;所述增殖培养基为在I升1/2MS基本培养基中加入下述原料及其配比制成:白砂糖25g琼脂粉5g 6-苄氨基嘌呤
1.0mg吲哚丁酸0.2mg ;所述生根培养基为在1/2MS基本培养基中加入下述原料及其配比制成:白砂糖25g琼脂粉5g吲哚丁酸0.5mg。针对培养基组成及其配比与无菌系建立、扩繁继代培养、生根培养等阶段培养效果的关系或影响，发明人做了实验研究，为了进一步阐述本发明，将实验数据和研究结果分述如下:1、不同基本培养基对试管苗初代培养的影响。试材选取I年生休眠枝条，剪取枝段(2cm左右长，带一个芽)，洗涤剂水浸泡3小时后流水冲洗10分钟,用升汞(HgCL2)消毒8分钟,无菌水冲洗4次,然后在超净工作台上用眼科镊子剥去外层的鳞片，按1.0mm-2.0mm大小的茎尖放置于不同培养基上，均附加25g蔗糖，5g琼脂，在此基础上添加·不同种类和浓度的生长调节剂，培养温度为25±2°C，光照强度为2000-30001x，光照时间12小时。由表I显示，三种不同类型的培养基对甜樱桃砧木Colt小茎尖的萌发存在一定的差异，三种类型的培养基都达到差异显著，均可诱导茎尖萌发，MSU/2MS其诱导率较高，分别为77%和86.3%，接种5天左右开始萌发，生长在MS的茎尖表现较好，叶片浅绿，l/2Ms培养基上苗木生长势较强，L基本培养，茎尖萌发较缓慢。接种一周以后，才开始萌动，叶片微黄绿，微卷，生长势一般。表I不同基本培养基对Colt试管苗初代培养的影响
权利要求
1.一种甜樱桃砧木Colt组织培养方法，其特征在于，它包括以下步骤:(1)初代培养春萌芽前选取一年生甜樱桃砧木Colt枝剪成2厘米长带芽段，分别用害立平溶液、HgCl2溶液消毒后，剥开该带芽段越冬芽磷片切取茎尖，接种于初代培养基上培养，所述初代培养基为1/2MS加入下述的原料及其配方比例:白砂糖25g琼脂粉5g 6-苄氨基嘌呤0.5 2.0mg吲哚丁酸0.01 0.10mg，培养条件:温度20 28°C，光照强度2000 2800Lx、光照时间10 12小时/天，湿度40 70% ; (2)继代培养将步骤(I)中初代培养的丛生茎尖转接到增殖培养基中培养，该增殖培养基为在I升1/2MS基本培养基中加入下述原料及其配比制成:白砂糖25g琼脂粉5g 6-节氨基嘌呤1.0 1.5mg Π引哚丁酸0.15 0.20mg,培养条件为:温度为20 28°C，光照强度2000 2800Lx、光照时间10 12小时/天，湿度为40% 70% ；(3)生根培养将步骤(2)中增殖培养的茎尖接入生根培养基中培养，该生根培养基为在I升1/2MS基本培养基中加入下述原料及其配比制成:白砂糖25g琼脂粉5g吲哚丁酸0.25 0.75mg，培养条件为:温度20 28°C，湿度40 70%，光照强度2000 2800LX，光照时间10 12小时/天；(4)炼苗培养和移栽包括如下环节:闭瓶锻炼、开瓶锻炼、移栽到蛭石基质、移栽到由细砂石、田园土、牛粪组成的营养土中。
2.根据权利要求1所述的甜樱桃砧木Colt组织培养方法，其特征在于，所述初代培养基为在I升1/2MS基本培养基中加入下述原料及其配比制成:白砂糖25g琼脂粉5g 6-苄氨基嘌呤1.0mg吲哚丁酸0.1mg ;所述增殖培养基为在I升1/2MS基本培养基中加入下述原料及其配比制成:白砂糖25g琼脂粉5g6-苄氨基嘌呤1.0mg吲哚丁酸0.2mg ;所述生根培养基为在1/2MS基本培养基中加入下述原料及其配比制成:白砂糖25g琼脂粉5g吲哚丁酸 0.5mg
全文摘要
本发明公开了一种甜樱桃砧木Colt组织培养方法，它包括以下步骤(1)初代培养选取一年生甜樱桃砧木Colt剥开其越冬芽磷片切取茎尖，接种于初代培养基上培养，所述培养基为1/2MS加入下述的原料及其配方比例白砂糖25g琼脂粉5g 6-苄氨基嘌呤0.5～2.0mg吲哚丁酸0.01～0.10mg；(2)继代培养转接到增殖培养基中培养，所述培养基为在1升1/2MS基本培养基中加入下述原料及其配比制成白砂糖25g琼脂粉5g 6-苄氨基嘌呤1.0～1.5mg吲哚丁酸0.15～0.20mg；(3)生根培养接入生根培养基中培养，所述培养基为在1升1/2MS基本培养基中加入下述原料及其配比制成白砂糖25g琼脂粉5g吲哚丁酸0.25～0.75mg；(4)炼苗培养和移栽。
文档编号A01H4/00GK103155869SQ20111045616
公开日2013年6月19日 申请日期2011年12月10日 优先权日2011年12月10日
发明者赵新红, 周代琴, 李帼英, 杨映红, 杨俊霞, 王艳芳, 郭志刚, 杨瑞斌, 王花, 李海青, 马建芳 申请人:天水市果树研究所