专利名称：一种青年牛高强度重复超数排卵的方法
技术领域：
本发明涉及家畜繁殖技术，特别涉及针对11-15月龄青年牛的高强度重复超数排 卵方法。
背景技术：
超数排卵反应受许多因素的影响，诸如不同激素制剂、不同激素批号、超排处理所 延续的时期。超排时所处的发情周期阶段、激素总剂量等。其中较重要的因素是与动物本 身的遗传性及其所处环境有关。这些因素包括营养状况、繁殖史、年龄、季节、品种、超排时 卵巢所处的状态以及重复超排的影响(余文莉等，1999)。 超数排卵的原理是基于卵泡波动力学基础。此概念最早是由Rajakoski在1960 年通过对屠宰场采集的牛卵巢进行测试提出的。他观察到在牛的整个发情周期中直径在 5mm以上的卵泡不是平均分配的，这些卵泡明显地表现出2个生长波(Evans A. C. O，et al， 2000)。有关这种牛发情周期中的卵泡波理论最终得到证实(Pierson RA， et al，1988; Savio JD， et al， 1988 ;Sirois J， et a1，1988)。在牛的发情周期中卵泡生长存在2_3个 发育波。 一个卵泡波被定义为一群卵泡同步生长，其中之一 (优势卵泡)继续生长，而其它 次级卵泡退化。只有当优势卵泡对其它卵泡生长的抑制作用减弱或受到抑制，或者FSH浓 度增加后下一个卵泡波才会出现。 实验证明，大多数牛在发情周期中存在2-3个卵泡发育波。最典型的是在牛卵巢 排卵后不久开始出现第一个卵泡波，8-10后出现第二个卵泡波。对于有二个卵泡波的母牛 来讲，从第二个卵泡波中出现的优势卵泡将会排卵。而对于拥有三个卵泡波的母牛来讲，在 牛发情周期的18天从第三个卵泡波中出现的优势卵泡将会排卵。 通常超排处理是在牛发情周期的8-12天(发情天为0天)，最初这一时间是根据 卵巢中卵泡波正处在成熟的时间来确定的。Lindse11 et al证明在发情周期的第9天开始 超排比第3，6， 12天时超排效果好，这一结果被最近的超声波探测所证实，对拥有三个卵泡 波的母牛来讲，第二个卵泡波正是在排卵后的第8. 5天开始(发情的第9. 5天)，而拥有二 个卵泡波的母牛来讲，是在排卵后的第9.5天开始，即发情的第10.5天开始。实际上，有二 个卵泡波的母牛的发情周期(18-20天)比三个卵泡波的母牛的发情周期(21-23天)短。 因此，通过以前发情周期的长短可为母牛选择最佳的超排时间提供线索。
已清楚地证明当超排处理的时间正好是新的卵泡波出现的时间时，超排反应最 好。超排处理比卵泡波出现的时间晚l天就使超排效果明显下降。根据优势卵泡在2个 或3个卵泡波中的发育情况，在任何时间内优势卵泡不是功能性优势卵泡的可能性为30% (有2个卵泡波的育成牛中20天中的6天)，和35% (有3个卵泡波的育成牛中23天中的 8天)。更重要的是，发情周期中大约只有20% (4-5天)时间利于开始超排(新的卵泡波 出现时间)，因此，发情周期中80%的时间不适合超排。只能等到母牛发情周期的中期开始 超排，时间不容易控制。 目前牛正常重复超排时间间隔为25-30天(M即letoft等，20Q2)，均使用14月龄以上的育龄青年牛和成年牛，有效縮短超排间隔是获得大量优良胚胎的重要手段，可进一 步提高供体牛的利用率。
发明内容
本发明提供一个高效、稳定、重复性强的育龄前青年牛超数排卵方法，一方面使超 排时间提前，另一方面使超排间隔縮短至21-26天，提高了供体牛的利用率，且不影响供体 牛后续自然繁殖能力。 —种青年牛高强度重复超数排卵的方法，包括如下步骤 (1)在供体母牛阴道内放入孕酮类阴道栓CIDR，并记录为第0天； (2)在第4、5、6、7天早晚各注射一次垂体促滤泡素FSH-P，按2. 0mg、1. 5mg、1. Omg、
0. 5mg的量递减注射，在第5次、第6次注射垂体促滤泡素FSH-P的同时分别注射0. 9mg、
0. 6mg 0. 3mg/ml的氯前列烯醇PG，在第7次注射时撤出孕酮类阴道栓CIDR ; (3)从上述第7次注射垂体促滤泡素FSH-P时，开始监控第一次发情时间点， (4)在第一次发情后12小时进行第一次人工受精，同时注射25mg促排3号GnRH，
间隔12小时后进行第二次人工受精； (5)在第一次发情后7 7. 5天以非手术方法采集胚胎， (6)在上一次非手术方法采集胚胎5-10天后，重复(1) (5)步骤进行第2次超 排，依次循环4-5次。 所述供体母牛指11.5 15月龄的母牛。 步骤(1)之前，所述供体母牛达11. 5月龄时，用300-400万单位的长效土霉素针 剂25-40ml清理子宫，然后筛选生殖系统无炎症的母牛。 步骤(1)之前，所述供体母牛10月龄时开始用蛋白含量18%以上的饲料饲喂。
所述早晚各注射一次，指早上7 8点注射一次，晚上18 19点注射一次。
本发明提供一种青年牛高强度重复超数排卯的方法，包括提供牛超排处理前的日 粮营养标准，生殖系统的预处理参数、超排激素处理程序，本发明按这一方法处理的供体 牛，其超排月龄提前到11. 5个月，超排间隔縮短至21-26天，经过对139头荷斯坦青牛奶 牛，13头弗拉威赫乳肉兼用牛，21头图西门塔尔青年牛进行连续超排处理，结果显示，本方 法高效，稳定，能充分挖掘了优良品种的母牛育龄前的繁殖潜力，在不影响其自然繁殖的时 间和能力的前提下，提前大量获得其胚胎和后代。 为了获得更好的超排处理效果，本方法优选采用11. 5 15月龄的母牛，进一步优 选步骤(1)前采用土霉素针剂处理子宫，已筛选生殖系统无炎症的供体牛，以保证获得健 康的胚胎。 本方法优选对处理前的供体牛进行日粮优化，使其获得最佳的营养，以保证提供 优质的胚胎。
具体实施方案 采用的化学试剂 CIDR(孕酮类阴道栓):1. 38mg孕酮；购买来源:New Zealand DEC Co. ，Ltd货号: K053071。
FSH-P (垂体促滤泡素)中国科学院动物研究所生产，10mg/瓶，用10ml生理盐水 稀释摇匀，随用随稀释，剩余稀释液冷藏保存不得超过12小时；
PG(氯前列烯醇)0. 3mg/ml ;购于齐鲁动物保健品有限公司 GnRH(促排3号)25mg/瓶；购买来源上海市计划生育科学研究所控股企业丹东 市绿丹和华动物药有限公司， 土霉素长效针剂300 400单位，天津市保灵动物保健品有限公司。
国标牛冷冻精液，进口的来自加拿大SEMEX公司，国内的来自省级种公牛站。
实施例1 :荷斯坦奶牛青年牛的高强度连续超数排卵
待试母牛139头荷斯坦青年奶牛 步骤1.从10月龄起，日粮方案调整为蛋白含量18%以上的饲料 步骤2.待试母牛至11. 5月龄时，用300-400单位的长效土霉素针剂25_40ml清
理子宫。 步骤3选择步骤2中处理的且生殖系统无炎症的接近12月龄待试母牛作为供体 牛，进行以下步骤的超排处理。 步骤4.以母牛放CIDR之日做为第0天，在放CIDR后第4、5、6、7天，每天早 (7:00-8:00)和晚(18:00-19:00)注射2次FSH-P，连续4天，递减注射，FSH注射梯度为:
(2. Omg+1. 5mg+l. Omg+0. 5mg) X 2 = 10mg 在第5、6次注射FSH的同时分别注射0. 9mg和0. 6mg氯前列烯醇，在第7次注射 FSH的同时撤出CIDR。 在第7次注射FSH-P之后，对超排供体牛，每隔6小时观察一次发情情况，每次半 小时以上，以母牛站立接受其它牛爬跨做为发情的标准。 在确认超排母牛发情后，已发情之时作为0时，在发情后12小时进行第1次人工 授精，同时注射25mg GnRH，在第1次输精后12小时进行第2次人工授精。使用国标冷冻精 液，每次1支。 在发情后7. 0-7. 5天用非手术法采集胚胎。以上过程需16天。 在非手术法采集胚胎后5-10天左右，对超排后的母牛放CIDR，开始进行第2次超
排，以此循环4-5次，每次间隔21-26天，直至母牛达15-16月龄。 结果，平均获得6. 01枚/头/次可用胚，在连续超排冲胚结束后，90头牛直接进行 1-3个发情期的人工授精，全群受胎率达95. 3% ;49头牛在连续超排冲胚结束后30-40天 做受体进行同期发情和胚胎移植，移植妊娠率达61.7%，超排的次数对移植妊娠率无显著 影响。 3、超排后母牛的繁殖 在最后一次超排结束后，对供体牛子宫做抗炎性清理，待母牛自然发情或进行同 期发情处理后即可进行人工授精，适时自繁；如果做受体进行胚胎移植，则需要在最后一次 超排冲胚结束后30-40天做同期发情处理。 实施例2 :弗拉威赫乳肉兼用牛的高强度连续超数排卵
待试牛弗拉威赫乳肉兼用牛
步骤同实施例1. 结果，对13头弗拉威赫青年牛从11. 5月龄开始连续超排、冲胚4-5次至15月龄，
5平均获得6. 13枚/头/次可用胚，在连续超排冲胚结束后，13头牛直接进行1-3个情期的 人工授精，全群受胎率达92.3%。 实施例3 :肉用西门塔尔牛的高强度连续超数排卵
待试牛21头肉用西门塔尔青年牛
步骤同实施例1. 结果从11. 5月龄开始连续超排、冲胚4-5次至15月龄，平均获得5. 85枚/头/ 次可用胚，在连续超排冲胚结束后未进行人工授精和胚胎移植。 以上实施案例说明，该技术方案高效、稳定，能够充分发挥育龄前的各品种母牛的 繁殖潜力，获得较高经济效益，且不影响其后的自然繁殖力，同时为奶牛、肉牛繁育和遗传 育种技术的开展提供了新的途径。
权利要求
一种青年牛高强度重复超数排卵的方法，包括如下步骤(1)在供体母牛阴道内放入孕酮类阴道栓CIDR，并记录为第0天；(2)在第4、5、6、7天早晚各注射一次垂体促滤泡素FSH-P，按2.0mg、1.5mg、1.0mg、0.5mg的量递减注射，在第5次、第6次注射垂体促滤泡素FSH-P的同时分别注射0.9mg、0.6mg 0.3mg/ml的氯前列烯醇PG，在第7次注射时撤出孕酮类阴道栓CIDR；(3)从上述第7次注射垂体促滤泡素FSH-P时，开始监控第一次发情时间点，(4)在第一次发情后12小时进行第一次人工受精，同时注射25mg促排3号GnRH，间隔12小时后进行第二次人工受精；(5)在第一次发情后7～7.5天以非手术方法采集胚胎，(6)在上一次非手术方法采集胚胎5-10天后，重复(1)～(5)步骤进行第2次超排，依次循环4-5次。
2. 根据权利要求1所述的方法，所述供体母牛指11. 5 15月龄的母牛。
3. 根据权利要求l所述的方法，步骤(1)之前，所述供体母牛达11.5月龄时，用 300-400万单位的长效土霉素针剂25-40ml清理子宫，然后筛选生殖系统无炎症的母牛。
4. 根据权利要求1所述的方法，步骤(1)之前，所述供体母牛10月龄时开始用蛋白含 量18%以上的饲料饲喂。
5. 根据权利要求1所述的方法，所述早晚各注射一次，指早上7 8点注射一次，晚上 18 19点注射一次。
全文摘要
本发明“一种青年牛高强度重复超数排卵的方法”，属于家畜繁殖技术领域，该方法包括对供体牛超排处理前的日粮营养标准的调整、生殖系统的预处理、超排激素处理程序及重复超排结束后的繁殖过程。使供体牛的超排时间提前至11.5月龄，超排间隔缩短至21-26天，能够充分发挥育龄前的各品种母牛的繁殖潜力，获得较高经济效益，且不影响其后的自然繁殖力。
文档编号A61D19/00GK101779988SQ20101911401
公开日2010年7月21日 申请日期2010年2月3日 优先权日2010年2月3日
发明者余文莉, 李树静 申请人:李树静;余文莉