专利名称：美洲狼尾草快速繁殖方法及美洲狼尾草快速脱毒繁殖方法
技术领域：
本发明属于植物组织培养技术领域，更具体涉及一种美洲狼尾草组培脱毒成苗的 快速繁殖的方法。
背景技术：
狼尾草为国家审定品种，具有产草量高、抗逆性强、品质好、耐刈割和全生育期无 明显病虫危害的特点，是草食畜禽的优质青饲料和理想的水土保持作物。近年来，随着杂交 狼尾草优质纸浆、中密度纤维板生产技术和作为生物质能源转化技术的不断完善，对杂交 狼尾草的需求量正在迅速增加。但在品种大面积推广应用时，发现杂交狼尾草有一定比例 的杂株，明显影响杂种优势的发挥及利用，究其原因与纯度有关。狼尾草常遭受病毒侵害， 使品质变劣，产量下降，同时也加速了品种退化。有关美洲狼尾草技术快速脱毒繁殖技术尚 未见正式报道。组织培养是一种高效的繁殖技术，采用幼嫩心叶或茎尖分生组织培养，也是获得 无病种苗的有效途径。传统的美洲狼尾草组培快繁方法，愈伤组织诱导及分化的继代次数 多，变异率较高，操作繁琐，污染机率大；腋芽培养和茎尖生长锥培养可有效地降低变异率， 但需经历小苗与丛生苗诱导、增殖培养和生根培养等多次继代。上述两条途径通常要对材 料进行至少几个月的培养，才可分化出苗，耗时长，效率低。因此，迫切需要技术方法上的改 进革新，以节约资源消耗，提高美洲狼尾草组培效率，为真正实现GAP栽培和规模化生产提 供技术平台，具有较大的应用前景
发明内容
有鉴于此，本发明所要解决的技术问题是针对现有技术中狼尾草常遭受病害侵 害，使品质变劣，产量下降，品种退化的缺点，提供一种能大量、快速繁殖美洲狼尾草，又能 脱除所带病毒并经特异检测，以确保无毒脱毒、组培与检测的配套方法。使美洲狼尾草实现 从幼嫩心叶和茎尖诱导愈伤组织到分化成完整或半完整的小苗，达到快速高效，操作简化， 降低变异率，节约成本的目的，为大量生产美洲狼尾草脱毒组培苗奠定良好的基础。为了达到上述目的，本发明采用如下技术方案来实现的一种美洲狼尾草快速繁殖方法，包括外植体的取材及灭菌、接种进行一次成苗培 养、生根培养、炼苗移栽步骤，其特征在于(1)外植体的取材及灭菌步骤取美洲狼尾草茎尖顶部或幼嫩心叶，作为脱毒组 培用外植体；用质量浓度为75%的乙醇溶液浸泡30s后再用另一份质量浓度为75%的乙醇 溶液浸泡60s，然后用无菌水冲洗3 5次，再用质量浓度为0. 的氯化汞溶液消毒5 lOmin，然后用无菌水冲洗3 5次；(2)诱导培养步骤在无菌条件下，将消毒好的外植体切成1个顶芽或腋芽、且长 度为1 2cm的茎段，接种于诱导培养基上，置于20-25°C的黑暗条件下培养5天，然后转入 光照条件培养，温度为20 23°C、湿度为60% 65%、光照强度为70 80 μ mol cm-2s-U每天光照12 14h的条件下培养至无菌芽生长长度为1 1. 5cm ；
(3)继代培养步骤将增生的无菌芽一起转接于继代培养基中，在温度为25 28°C、湿度为70% 80%、光照强度为40 60μπιο1 cm-2s_l、每天光照16 18h的条件 下培养至无菌芽生长长度为2 5cm即为微枝苗；(4)壮苗培养步骤将每个微枝苗接种于壮苗培养基中，在温度为25 28°C、湿度 为70% 80%、光照强度为40 60 μ mol cm-2s-l、每天光照16 18h的条件下培养至微 枝生长长度为6 8cm ；(5)生根培养步骤将增壮后的微枝切割成带有1个顶芽或1 2个腋芽、且长度 为1 2cm的茎段，然后逐段接种于生根培养基进行生根培养；(6)炼苗移栽步骤将生根培养30天且根系达2-3cm的完整小苗，进行炼苗移栽。一种美洲狼尾草快速脱毒繁殖方法，包括外植体的取材及灭菌、接种进行一次成 苗培养、生根培养、炼苗移栽等步骤，其特征在于(1)外植体的取材及灭菌步骤取美洲狼尾草茎尖顶部或幼嫩心叶，作为脱毒组 培用外植体；用质量浓度为75%的乙醇溶液浸泡30s后再用另一份质量浓度为75%的乙醇 溶液浸泡60s，然后用无菌水冲洗3 5次，再用质量浓度为0. 的氯化汞溶液消毒5 lOmin，然后用无菌水冲洗3 5次；(2)诱导培养步骤在无菌条件下，将消毒好的外植体切成1个顶芽或腋芽、且长 度为1 2cm的茎段，接种于诱导培养基上，置于20-25°C的黑暗条件下培养5天，然后转入 光照条件培养，温度为20 23°C、湿度为60% 65%、光照强度为70 80 μ mol cm-2s-U 每天光照12 14h的条件下培养至无菌芽生长长度为1 1. 5cm ；(3)继代培养步骤将增生的无菌芽一起转接于继代培养基中，在温度为25 28°C、湿度为70% 80%、光照强度为40 60 μ mol cm-2s_l、每天光照16 18h的条件 下培养至无菌芽生长长度为2 5cm即为微枝苗；(4)壮苗培养步骤将每个微枝苗接种于壮苗培养基中，在温度为25 28°C、湿度 为70% 80%、光照强度为40 60 μ mol cm-2s-l、每天光照16 18h的条件下培养至微 枝生长长度为6 8cm。(5)生根培养步骤将增壮后的微枝切割成带有1个顶芽或1 2个腋芽、且长度 为1 2cm的茎段，然后逐段接种于生根培养基进行生根培养；(6)炼苗移栽步骤将生根培养30天且根系达2-3cm的完整小苗，进行炼苗移栽；(7)病毒ELISA检测将田间病株所携带的花叶病毒(fritillary mosaicVirus, FMV)和Y病毒(Fritillary virus Y，FVY)，经扩增、克隆和原核表达后，所获得的大量相关 病毒外壳蛋白，制备成病毒特异性抗血清后，对美洲狼尾草组培成苗进行病毒ELISA检测。其中步骤(2)中诱导培养基是以改良1/2MS固体培养基为基本培养基，且还包 含0. 3 0. 5mg/L的ΚΤ、0. 03 0. 05mg/L的IAA、3000_4000mg/L的卡拉胶和质量浓度为 1. 5 2. 0%的白砂糖，培养基pH值为5. 0 5. 5 ；步骤(3)中继代培养基是以改良MS固培 养基为基本培养基，且还包含0. 05 0. lmg/L的6-BA、0. 01 0. 05mg/L的NAA和质量浓度 为2. 0 2. 5%的蔗糖，培养基pH值为5. 6 6. 0 ；步骤(4)中壮苗培养基是以MS固培养 基为基本培养基，且还包含质量浓度为2. 0 2. 5 %的蔗糖，培养基pH值为5. 6 6. 0 ；步 骤(5)中生根培养基是以改良1/4MS固培养基为基本培养基，培养基且还包含0. 5-1. 5mg/L的NAA，1-2. 5mg/L的IBA和质量浓度为2. O 2. 5%的白砂糖，培养基pH值为5. 6 6. O ； 步骤(6)中生根基质按质量比为50%的草炭土、25%的蛭石和25%的珍珠岩组成，生 根基 质含水量为30% 40%。由上述技术方案可知，本发明的有益效果是利用美洲狼尾草幼嫩心叶和茎尖产生少量的胚性愈伤组织分化成再生植株，有效 地避免了愈伤加繁过程中，变异的出现，更好地保持了原有材料的种性；建立的美洲狼尾草病毒(FMV和FVY)外壳蛋白基因RT-PCR扩增、克隆、原核表达 及高灵敏度ELISA检测体系，通过该检测技术应用，可保证脱毒美洲狼尾草中无病毒存在， 为进一步控制病毒病发生传播，美洲狼尾草品种提纯复壮奠定了基础；建立的美洲狼尾草脱毒组培快繁技术体系，脱毒效果好，其生根率达100%，移栽 成活率达95%以上，适合工厂化育苗，可商品化生产，适用于美洲狼尾草种苗工厂化快速繁 殖，从而大大节省了传统方法的繁种用地。为大量工厂化育苗，提供了有力的保障。
具体实施例方式为了使本领域技术人员能更进一步了解本发明的特征及技术内容，通过以下实施 例对本发明作进一步的详细说明。实施例一(1)外植体的取材及灭菌步骤于5月份，晴好天气，取美洲狼尾草茎尖顶部，作 为脱毒组培用外植体；用质量浓度为75%的乙醇溶液浸泡30s后再用另一份质量浓度为 75%的乙醇溶液浸泡60s，然后用无菌水冲洗3次，再用质量浓度为0. 的氯化汞溶液消 毒5min，然后用无菌水冲洗3次；(2)诱导培养步骤在无菌条件下，将消毒好的外植体切成1个顶芽或腋芽、且长 度为Icm的茎段，接种于一次成苗培养基上，保持茎段形态学上端向上的方式将茎段垂直 插入培养基中，置于20°C的黑暗条件下培养5天，然后转入光照条件培养，温度为20°C、湿 度为60% %、光照强度为70 μ mol cm-2s-l、每天光照12h的条件下培养至无菌芽生长长度 为 Icm ；(3)继代培养步骤将增生的无菌芽一起转接于继代培养基中，在温度为25°C、湿 度为70%、光照强度为40 μ mol cm-2s-l、每天光照16h的条件下培养至无菌芽生长长度为 2cm，即为微枝苗；(4)壮苗培养步骤将每个微枝苗接种于壮苗培养基中，在温度为25°C、湿度为 70%、光照强度为40 μ mol cm-2s-l、每天光照16h的条件下培养至微枝生长长度为4cm ；(5)生根培养步骤将增壮后的微枝切割成带有1个顶芽或1 2个腋芽、且长度 为Icm的茎段，然后逐段接种于生根培养基进行生根培养；(6)炼苗移栽步骤将生根培养30天且根系达2cm的完整小苗，进行炼苗移栽；将 成苗周围的生根基质压实并在生根基质表面和微枝叶面上略喷水，然后覆上保鲜膜在培养 室内培养；每天以喷洒的方式浇水5次/周，每天早晚揭膜6min通风换气，7天后去膜，培 养7天；(7)病毒ELISA检测将田间病株所携带的花叶病毒(fritillary mosaicVirus, FMV)，经扩增、克隆和原核表达后，所获得的大量相关病毒外壳蛋白，制备成病毒特异性抗血清后，对美洲狼尾草组培成苗进行病毒ELISA检测。 其中步骤⑵中诱导培养基是以改良1/2MS固体培养基为基本培养基，且还包含 0. 3mg/L的KT,0. 03mg/L的IAA、3000mg/L的卡拉胶和质量浓度为1. 5%的白砂糖，pH值 为5.0;步骤(3)中继代培养基是以改良MS固培养基为基本培养基，且还包含0.05mg/L的 6-BA、0.01mg/L的NAA和质量浓度为2.0%的蔗糖，pH值为5. 6 ；步骤(4)中壮苗培养基是 以MS固培养基为基本培养基，且还包含质量浓度为2.0%的蔗糖，pH值为5. 6;步骤(5) 中生根培养基是以改良1/4MS固培养基为基本培养基，且还包含0. 5mg/L的NAA，lmg/L的 IBA和质量浓度为2.0%的白砂糖，pH值为5. 6;步骤(6)中生根基质按质量比为50%的草 炭土、25%的蛭石和25%的珍珠岩组成，生根基质含水量为30%。实施例二(1)外植体的取材及灭菌步骤于10月份，晴好天气，取美洲狼尾草幼嫩心叶，作 为脱毒组培用外植体；用质量浓度为75%的乙醇溶液浸泡30s后再用另一份质量浓度为 75%的乙醇溶液浸泡60s，然后用无菌水冲洗5次，再用质量浓度为0. 的氯化汞溶液消 毒lOmin，然后用无菌水冲洗5次；(2)诱导培养步骤在无菌条件下，将消毒好的外植体切成1个顶芽或腋芽、且 长度为2cm的茎段，接种于一次成苗培养基上，保持茎段形态学上端向上的方式将茎段垂 直插入诱导培养基中，置于25°C的黑暗条件下培养5天，然后转入光照条件培养，温度为 23°C、湿度为65%、光照强度为SOymol cm-2s-l、每天光照14h的条件下培养至无菌芽生 长长度为1. 5cm ；(3)继代培养步骤将增生的无菌芽一起转接于继代培养基中，在温度为28°C、湿 度为80%、光照强度为60 μ mol cm-2s-l、每天光照18h的条件下培养至无菌芽生长长度为 5cm，即为微枝苗；(4)壮苗培养步骤将每个微枝苗接种于壮苗培养基中，在温度为28°C、湿度为 80%、光照强度为60 μ mol cm-2s-l、每天光照18h的条件下培养至微枝生长长度为6cm ；(5)生根培养步骤将增壮后的微枝切割成带有1个顶芽或2个腋芽、且长度为 2cm的茎段，然后逐段接种于生根培养基进行生根培养；(6)炼苗移栽步骤将生根培养30天且根系达3cm的完整小苗，进行炼苗移栽；将 成苗周围的生根基质压实并在生根基质表面和微枝叶面上略喷水，然后覆上保鲜膜在培养 室内培养；每天以喷洒的方式浇水3次/周，每天早晚揭膜6-lOmin通风换气，10天后去膜， 培养10天；(7)病毒ELISA检测将田间病株所携带的Y病毒(Fritillary virus Y，FVY)，经 扩增、克隆和原核表达后，所获得的大量相关病毒外壳蛋白，制备成病毒特异性抗血清后， 对美洲狼尾草组培成苗进行病毒ELISA检测。其中步骤⑵中诱导培养基是以改良1/2MS固体培养基为基本培养基，且还包含 0. 5mg/L的KT、0. 05mg/L的IAA、4000mg/L的卡拉胶和质量浓度为2. 0%的白砂糖，pH值 为5.5;步骤(3)中继代培养基是以改良MS固培养基为基本培养基，且还包含0. lmg/L的 6-BA、0. 05mg/L的NAA和质量浓度为2. 5 %的蔗糖，pH值为6. 0 ；步骤(4)中壮苗培养基 是以MS固培养基为基本培养基，且还包含质量浓度为2. 5%的蔗糖，pH值为6. 0 ；步骤(5) 中生根培养基是以改良1/4MS固培养基为基本培养基，且还包含1. 5mg/L的NAA，1-2. 5mg/L的IBA和质量浓度为2. 5%的白砂糖，pH值为6. O ；步骤(6)中生根基质按质量比为50% 的草炭土、25%的蛭石和25%的珍珠岩组成，生根基质含水量为30% 40%。采用本发明的技术方案，40-50天左右即可得到带有少量根系的株高约3-5cm的 瓶苗，50-70天左右，获得带根的美洲狼尾草完整小苗。一段美洲狼尾草梢部经50-70天时 间可繁殖出100-200株种苗，利用本发明简化了美洲狼尾草组培苗生产的程序，节约成本， 成苗率高，显著缩短了美洲狼尾草组培苗的生产周期。但以上所述仅为本发明的较佳可行实施例，并非用以局限本发明的专利范围，故 凡运用本发明说明书内容所作的等效结构变化，均同理包含在本发明的范围内。
权利要求
一种美洲狼尾草快速繁殖方法，包括外植体的取材及灭菌、接种进行一次成苗培养、生根培养、炼苗移栽步骤，其特征在于(1)外植体的取材及灭菌步骤取美洲狼尾草茎尖顶部或幼嫩心叶，作为脱毒组培用外植体；用质量浓度为75％的乙醇溶液浸泡30s后再用另一份质量浓度为75％的乙醇溶液浸泡60s，然后用无菌水冲洗3～5次，再用质量浓度为0.1％的氯化汞溶液消毒5～10min，然后用无菌水冲洗3～5次；(2)诱导培养步骤在无菌条件下，将消毒好的外植体切成1个顶芽或腋芽、且长度为1～2cm的茎段，接种于诱导培养基上，置于20 25℃的黑暗条件下培养5天，然后转入光照条件培养，温度为20～23℃、湿度为60％～65％、光照强度为70～80μmol cm 2s 1、每天光照12～14h的条件下培养至无菌芽生长长度为1～1.5cm；(3)继代培养步骤将增生的无菌芽一起转接于继代培养基中，在温度为25～28℃、湿度为70％～80％、光照强度为40～60μmol cm 2s 1、每天光照16～18h的条件下培养至无菌芽生长长度为2～5cm即为微枝苗；(4)壮苗培养步骤将每个微枝苗接种于壮苗培养基中，在温度为25～28℃、湿度为70％～80％、光照强度为40～60μmol cm 2s 1、每天光照16～18h的条件下培养至微枝生长长度为6～8cm；(5)生根培养步骤将增壮后的微枝切割成带有1个顶芽或1～2个腋芽、且长度为1～2cm的茎段，然后逐段接种于生根培养基进行生根培养；(6)炼苗移栽步骤将生根培养30天且根系达2 3cm的完整小苗，进行炼苗移栽。
2.根据权利要求1所述的一种美洲狼尾草快速繁殖方法，其特征在于其中步骤⑵ 中诱导培养基是以改良V2MS固体培养基为基本培养基，且还包含0. 3 0. 5mg/L的KT、 0. 03 0. 05mg/L的IAA、3000_4000mg/L的卡拉胶和质量浓度为1. 5 2. 0%的白砂糖，培 养基PH值为5.0 5. 5;步骤(3)中继代培养基是以改良MS固培养基为基本培养基，且还 包含0. 05 0. lmg/L的6-BA、0. 01 0. 05mg/L的NAA和质量浓度为2. 0 2. 5%的蔗糖， 培养基PH值为5. 6 6.0;步骤(4)中壮苗培养基是以MS固培养基为基本培养基，且还包 含质量浓度为2. 0 2. 5%的蔗糖，培养基pH值为5. 6 6. 0 ；步骤(5)中生根培养基是以 改良1/4MS固培养基为基本培养基，培养基且还包含0. 5-1. 5mg/L的NAA，1-2. 5mg/L的IBA 和质量浓度为2.0 2. 5%的白砂糖，培养基pH值为5.6 6.0 ；步骤(6)中生根基质按质 量比为50%的草炭土、25%的蛭石和25%的珍珠岩组成，生根基质含水量为30% 40%。
3.一种美洲狼尾草快速脱毒繁殖方法，包括外植体的取材及灭菌、接种进行一次成苗 培养、生根培养、炼苗移栽、脱毒检测等步骤，其特征在于(1)外植体的取材及灭菌步骤取美洲狼尾草茎尖顶部或幼嫩心叶，作为脱毒组培用 外植体；用质量浓度为75%的乙醇溶液浸泡30s后再用另一份质量浓度为75%的乙醇溶液 浸泡60s，然后用无菌水冲洗3 5次，再用质量浓度为0. 1 %的氯化汞溶液消毒5 lOmin， 然后用无菌水冲洗3 5次；(2)诱导培养步骤在无菌条件下，将消毒好的外植体切成1个顶芽或腋芽、且长度为 1 2cm的茎段，接种于诱导培养基上，置于20-25°C的黑暗条件下培养5天，然后转入光照 条件培养，温度为20 23°C、湿度为60% 65%、光照强度为70 80 μ mol cm-2s-l、每 天光照12 14h的条件下培养至无菌芽生长长度为1 1. 5cm ；(3)继代培养步骤将增生的无菌芽一起转接于继代培养基中，在温度为25 28°C、湿 度为70% 80%、光照强度为40 60 μ mol cm-2s-l、每天光照16 18h的条件下培养至 无菌芽生长长度为2 5cm即为微枝苗；(4)壮苗培养步骤将每个微枝苗接种于壮苗培养基中，在温度为25 28°C、湿度为 70% 80%、光照强度为40 60 μ mol cm-2s-l、每天光照16 18h的条件下培养至微枝 生长长度为6 8cm ；(5)生根培养步骤将增壮后的微枝切割成带有1个顶芽或1 2个腋芽、且长度为 1 2cm的茎段，然后逐段接种于生根培养基进行生根培养；(6)炼苗移栽步骤将生根培养30天且根系达2-3cm的完整小苗，进行炼苗移栽；(7)病毒ELISA检测将田间病株所携带的花叶病毒(fritillarymosaicVirus, FMV) 和Y病毒(Fritillary virus Y，FVY)，经扩增、克隆和原核表达后，所获得的大量相关病毒 外壳蛋白，制备成病毒特异性抗血清后，对美洲狼尾草组培成苗进行病毒ELISA检测。
4.根据权利要求3所述的一种美洲狼尾草快速脱毒繁殖方法，其特征在于其中步骤 (2)中诱导培养基是以改良1/2MS固体培养基为基本培养基，且还包含0. 3 0. 5mg/L的 KT,0. 03 0. 05mg/L的IAA、3000_4000mg/L的卡拉胶和质量浓度为1. 5 2. 0%的白砂糖， 培养基PH值为5.0 5.5;步骤(3)中继代培养基是以改良MS固培养基为基本培养基，且 还包含0. 05 0. lmg/L的6-BA、0. 01 0. 05mg/L的NAA和质量浓度为2. 0 2. 5%的蔗 糖，培养基PH值为5. 6 6. 0 ；步骤⑷中壮苗培养基是以MS固培养基为基本培养基，且 还包含质量浓度为2. 0 2. 5%的蔗糖，培养基pH值为5. 6 6. 0 ；步骤(5)中生根培养基 是以改良1/4MS固培养基为基本培养基，培养基且还包含0. 5-1. 5mg/L的NAA，1-2. 5mg/L 的IBA和质量浓度为2. 0 2. 5%的白砂糖，培养基pH值为5. 6 6. 0 ；步骤(6)中生根基 质按质量比为50%的草炭土、25%的蛭石和25%的珍珠岩组成，生根基质含水量为30% 40%。
5.一种美洲狼尾草快速脱毒繁殖方法，包括外植体的取材及灭菌、接种进行一次成苗 培养、生根培养、炼苗移栽等步骤，其特征在于(1)外植体的取材及灭菌步骤取美洲狼尾草茎尖顶部或幼嫩心叶，作为脱毒组培用 外植体；用质量浓度为75%的乙醇溶液浸泡30s后再用另一份质量浓度为75%的乙醇溶液 浸泡60s，然后用无菌水冲洗3 5次，再用质量浓度为0. 1 %的氯化汞溶液消毒5 lOmin， 然后用无菌水冲洗3 5次；(2)诱导培养步骤在无菌条件下，将消毒好的外植体切成1个顶芽或腋芽、且长度为 1 2cm的茎段，接种于诱导培养基上，置于20-25°C的黑暗条件下培养5天，然后转入光照 条件培养，温度为20 23°C、湿度为60% 65%、光照强度为70 80 μ mol cm-2s-l、每 天光照12 14h的条件下培养至无菌芽生长长度为1 1. 5cm ；(3)继代培养步骤将增生的无菌芽一起转接于继代培养基中，在温度为25 28°C、湿 度为70% 80%、光照强度为40 60 μ mol cm-2s-l、每天光照16 18h的条件下培养至 无菌芽生长长度为2 5cm即为微枝苗；(4)壮苗培养步骤将每个微枝苗接种于壮苗培养基中，在温度为25 28°C、湿度为 70% 80%、光照强度为40 60 μ mol cm-2s-l、每天光照16 18h的条件下培养至微枝 生长长度为6 8cm ；(5)生根培养步骤将增壮后的微枝切割成带有1个顶芽或1 2个腋芽、且长度为 1 2cm的茎段，然后逐段接种于生根培养基进行生根培养；(6)炼苗移栽步骤将生根培养30天且根系达2-3cm的完整小苗，进行炼苗移栽；将小 苗周围的生根基质压实并在生根基质表面和微枝叶面上略喷水，然后覆上保鲜膜在培养室 内培养；每天以喷洒的方式浇水5次/周，每天早晚揭膜6min通风换气，7天后去膜，培养7 天；(7)病毒ELISA检测将田间病株所携带的花叶病毒(fritillarymosaicVirus, FMV) 和Y病毒(Fritillary virus Y，FVY)，经扩增、克隆和原核表达后，所获得的大量相关病毒 外壳蛋白，制备成病毒特异性抗血清后，对美洲狼尾草组培成苗进行病毒ELISA检测；其中步骤(2)中诱导培养基是以改良1/2MS固体培养基为基本培养基，且还包含0.3 0. 5mg/L的ΚΤ、0. 03 0. 05mg/L的IAA、3000_4000mg/L的卡拉胶和质量浓度为1.5 2. 0%的白砂糖，培养基pH值为5. 0 5. 5 ；步骤(3)中继代培养基是以改良MS固培 养基为基本培养基，且还包含0. 05 0. lmg/L的6-BA、0. 01 0. 05mg/L的NAA和质量浓度 为2. 0 2. 5%的蔗糖，培养基pH值为5. 6 6. 0 ；步骤(4)中壮苗培养基是以MS固培养 基为基本培养基，且还包含质量浓度为2. 0 2. 5%的蔗糖，培养基pH值为5. 6 6. 0 ；步 骤(5)中生根培养基是以改良1/4MS固培养基为基本培养基，培养基且还包含0. 5-1. 5mg/L 的NAA，1-2. 5mg/L的IBA和质量浓度为2. 0 2. 5%的白砂糖，培养基pH值为5. 6 6. 0。
全文摘要
本发明涉及一种美洲狼尾草快速繁殖方法及美洲狼尾草快速脱毒繁殖方法，包括外植体的取材及灭菌、接种进行一次成苗培养、生根培养、炼苗移栽、脱毒检测等步骤。建立的美洲狼尾草脱毒组培快繁技术体系，脱毒效果好，其生根率达100％，移栽成活率达95％以上，适合工厂化育苗，可商品化生产，适用于美洲狼尾草种苗工厂化快速繁殖，从而大大节省了传统方法的繁种用地。为大量工厂化育苗，提供了有力的保障。
文档编号A01H4/00GK101953304SQ20101051106
公开日2011年1月26日 申请日期2010年10月19日 优先权日2010年10月19日
发明者赵国平 申请人:赵国平