专利名称：：皮特兰猪的选育方法
技术领域：
：本发明属于畜牧选育
技术领域：
，尤指一种皮特兰猪的选育方法。
背景技术：
：皮特兰猪是目前瘦肉率最高的猪种，原产于比利时布拉邦特地区，是先由比利时的本地猪与法国的贝衣猪杂交，后又引入英国的泰姆沃斯猪的血统杂交而成，1955年被欧洲各国所公认，是近十几年来欧洲较为流行的猪种。我国于1988年从法国引进皮特兰猪，在我国主要是被用作二元或三元杂交生产的父本，以提高杂交商品猪的瘦肉率水平。尽管皮特兰猪具有极高的瘦肉率，但它的应激反应严重，常常在运输途中死亡或出现PSE肉(Pale，SoftandExudative,即灰白、松软和渗出液汁)，给养猪企业带来巨大损失。现代分子生物学的研究认为，位于猪第6号染色体上pll-q21区域的氟烷基因(HalothaneGene)是决定PSE从而影响肉质的主效基因。目前已知氟烷座位(Hal)有三种基因型HalNHalN、HalNHaln、HalnHaln(常用N表示显性，用n表示隐性)，前两种基因型对氟烷不敏感(为氟烷阴性)，后一种为敏感型个体(氟烷阳性)，氟烷基因呈隐性纯合时，导致猪应激综合症频繁发生。如此一来就迫切需要选育出对氟烷不敏感的阴性皮特兰猪。然而常规的育种技术是根据表现型来进行选育的，而表现型取决于基因型。对于氟烷基因来讲，一般常规技育种术是利用氟烷气体来进行测试，只有氟烷基因呈隐性纯合即为HalnHaln时，猪才会阳性反应，而对杂合子HalNHaln而言，此技术无能为力！若采用常规技术努力提高种猪和商品猪瘦肉率的同时，就会发现氟烷隐性基因的频率在猪群中有升高的趋势。也有许多研究表明，无氟烷隐性基因的纯合体HalNHalN皮特兰猪的肉质性状如肉色和嫩度等方面较优越，但纯合体HalNHalN皮特兰猪的胴体性状如瘦肉率等却有所降低。
发明内容本发明的目的之一是降低皮特兰猪群的应激反应和PSE肉的出现机率，实现这一目的的有效方法之一是对皮特兰猪群进行无氟烷隐性基因的选育，采用分子辅助标记选择手段鉴别个体皮特兰猪的氟烷基因及其基因型，将氟烷隐性基因的皮特兰猪从猪群中剔除出去。本发明的皮特兰猪的选育方法，包括如下步骤A)组建基础选育群体，该群体中至少有一头具有HalN基因的皮特兰猪；B)培育皮特兰公猪和母猪并进行选配产仔，选配措施是配种的每对皮特兰公母猪中至少一头具有HalN基因，提高下一代皮特兰猪群体的HalN基因频率；C)培育仔猪并进行选种，选种措施是检测每一仔猪的Hal基因，选留具有HalN基因的皮特兰猪以及综合选择指数高的具有Haln基因的皮特兰猪作为种猪；D)重复步骤B)和步骤C)510次。3步骤A)中，组建的皮特兰猪基础选育群体共120头以上，含有5个血统，公猪与母猪的比例为1:46。如果在选择步骤A)的基础选育群体时，试验场所有皮特兰猪经检测均没有HalN基因，则可引进具有HalN基因的皮特兰公猪精液，导入到皮特兰母猪，然后培养仔猪并将具有HalN基因的仔猪纳入选育群体。步骤A)中，组建基础选育群体的首要原则是首先选择HalNHalN基因型的皮特兰猪，其次选择HalNHaln基因型的皮特兰猪，最后选择HalnHaln基因型的皮特兰猪。步骤B)中，选配措施是首先选择HalNHalN基因型的皮特兰猪，其次选择HalNHaln基因型的皮特兰猪进行配种，加快提高下一代皮特兰猪群体的HalN基因频率。例如可以选择的交配模式包括HalNHalNXHalNHalN,HalNHalNXHalNHaln，HalNHalnXHalNHalN，HalNHalnXHalNHaln禾口HalNHalNXHalnHaln。优选HalNHalNXHalNHalN,HalNHalNXHalNHaln,HalNHalnXHalNHalN的交配模式，更优选HalNHalNXHalNHalN的交配模式。步骤C)中，选种措施是大力保留HalNHalN基因型的猪，择优选留HalNHaln基因型的猪，严格剔除HalnHaln基因型的猪。本发明的另一目的是为了在降低皮特兰猪群的应激反应和PSE肉的出现机率的同时，提高皮特兰猪群的胴体性状、生长性能等指标。因此组建基础选育群体的次要原则是取综合选择指数SI值高的皮特兰猪纳入基础选育群体，其中^=。.06鲁+0.06会+0'135鲁+0.144鲁。尸l尸2尸3尸4步骤B)中，选配的另一措施是取综合选择指数SI值高的皮特兰猪进行配种。步骤C)中，取综合选择指数SI值高的皮特兰猪作为种猪。步骤C)中，培育仔猪并进行选种时还进行淘汰制选择，于仔猪28士4日龄时进行第一次选留，淘汰体质虚弱、体型外貌差、发育不良者；于皮特兰猪120±10日龄进行第二次选留，对少数发育不良，体重小于40kg以及体型外貌差者予以淘汰；于皮特兰猪180±10日龄进行第三次选留，严格剔除外阴畸形或发育不良、脐疝者；选种时同时参考其父母产仔性能和同胞生长性能。在基础选育群体及各世代的选育中，采用PCR-RFLPs方法检测皮特兰猪的Hal基因。在基础选育群体及各世代的选育中，选留种猪数120头以上，公母猪比例为i:46。在无氟烷隐性基因皮特兰猪的选育过程中，选种选配的首要原则是优选采用HalNHalN基因型皮特兰猪，其次采用HalNHaln基因型皮特兰猪，最后采用HalnHaln基因型皮特兰猪，利用该方法可以快速提高皮特兰猪群体的HalN基因频率以及HalNHalN基因型频率；选种选配的次要原则是选择综合选择指数SI值高的皮特兰猪，通过选择综合选择指数SI值高的皮特兰猪进行选配选种可以使得皮特兰猪群体的生产性能下降得不至于过快，同时有机会将非HalNHalN基因型皮特兰猪的其它优秀性状如胴体性能、生长性能等逐渐固定到具HalNHalN基因型皮特兰猪上，提高整个皮特兰猪群的各生产性能。本发明取得的积极进步效果在于在选育出的皮特兰猪群体中，HalnHaln基因型皮特兰猪完全剔除出去，Haln基因频率也基本为O，无应激和PSE肉；群体中皮特兰猪平均日增重高达740g，瘦肉率也在72X以上。具体实施例方式实施例1组建基础选育群体取上海市农业科学院畜牧兽医研究所试验猪场的皮特兰猪、上海大江畜禽公司种猪场内的皮特兰猪、北京顺鑫农业茶棚原种猪场的皮特兰猪耳组织样，采用文献[谈永松，张似青，张忠明，何玉英，刘红林，王林云.PCR-RFLPs检测法在无氟烷隐性基因皮特兰猪建群中的应用.上海农业学报，2001，17(3):34-37]报道的PCR-RFLPs方法检测皮特兰猪的氟烷基因。并记录上海市农业科学院畜牧兽医研究所试验猪场的每头皮特兰猪的达100kg日龄、饲料转化率、活体背膘厚、眼肌面积等指标，计算综合选择指数SI(SelectionIndex)。根据所有皮特兰猪的SI值，从最高值往下选择一直到组建基础选育群所需要的头数。其中，=『A2+『A2=+……『A2,1尸2尸"式中W代表性状的经济重要性，权数W,W^…Wn=1.0h2=性状的遗传力，P=某一性状的群体平均数，P=某一性状的个体表型值。皮特兰猪共选择四个性状加以考虑，分别为代表生长性状的达100kg的日龄P工和饲料转化率P2，代表胴体性状的活体背膘厚P3和眼肌面积P4，则所对应的性状遗传力分别为hi2=o.30、h22=o.30、h32=o.45、h42=o.48，根据育种目标，皮特兰猪的上述四个性状的经济重要性分别为^=20%、W2=20%、W3=30%、W4=30%，则皮特兰猪的综合选择指数/>/>P57=20%x0.30x4+20%x0.30x4+30%x0.45x4+30%x0.48x4S尸2AA=0.06^+0.06^+0.135!+0.144&SA尸3A结果所有皮特兰猪均未检测到HalN基因，均为HalnHaln基因型，根据综合选择指数SI值共选得HalnHaln基因型皮特兰猪120头，15头公猪，共有5个血统。实施例2导入具有HalN基因皮特兰猪外血产生一世代猪从法国引进含N基因的法系皮特兰猪精液，及时对实施例1的基础选育群体中的10头皮特兰母猪按照常规方法进行人工授精，产生一世代，PCR-RFLPs方法检测一世代猪的Hal基因。结果经检测，共产生127头仔猪，具有HalN基因的皮特兰杂合子仔猪19头，纳入选育群体中。实施例3选育扩大HalN基因皮特兰猪个体数和出现HalNHalN基因型皮特兰猪个5体采用HalNHalnXHalNHaln的交配模式，尽可能多地扩大含HalN基因的皮特兰猪个体数，同时也期望能获得HalNHalN基因型的皮特兰猪。同时为了充分利用皮特兰公猪的HalN基因，也采用HalNHalnXHalnHaln交配模式，以扩大含HalN基因的皮特兰猪个体数。采用系祖建系法与群体继代选育法相结合的方法，培养皮特兰公猪和母猪，根据上述交配模式产仔猪并进行选种，给每头皮特兰猪建立详细的档案资料。于仔猪出生时采集耳组织样，利用PCR-RFLPs方法检测氟烷基因及其基因型；于仔猪28日龄时进行第一次选留，淘汰体质虚弱、体型外貌差、发育不良者；于皮特兰猪4月龄进行第二次选留，对少数发育不良，体重小于40kg以及体型外貌差者予以淘汰；于皮特兰猪6月龄进行第三次选留，严格剔除外阴畸形或发育不良、脐疝者。根据氟烷基因及其基因型，最后保留HalNHalN基因型、HalNHaln基因型和优秀HalnHaln基因型的皮特兰猪作为种猪，同时根据每头皮特兰猪的胴体性能和生长性能指标计算出的SI值，从高到低进行选择120头种猪，公母比例为1:5，选种时同时参考其父母产仔性能和同胞生长性能。苴中57=0.065^+0.06^+0.1355^+0.144&'^尸2尸3尸4表1各世代皮特兰猪的Hal基因情况<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>备注表格中的0世代即为基础群皮特兰猪，1世代即是实施例2的仔猪从表1可以看出，经过有目的的选种配种，各世代的皮特兰猪的HalN频率呈现上升趋势，至2世代出现了HalNHalN皮特兰猪个体12头。实施例4继续逐代选育提高皮特兰猪群体HalNHalN基因型频率采用系祖建系法与群体继代选育法相结合的方法，培养皮特兰公猪和母猪，根据HalNHalNXHalNHaln、HalNHalnXHalNHalN、HalNHalnXHalNHaln、HalNHalNXHalnHaln交配模式选配产仔猪并进行选种，给每头皮特兰猪建立详细的档案资料，记录达100kg日龄、饲料转化率、活体背膘厚、眼肌面积等数据。仔猪出生后采集耳组织样，利用PCR-RFLPs方法检测氟烷基因及其基因型；于仔猪28日龄时进行第一次选留，淘汰体质虚弱、体型外貌差、发育不良者；于皮特兰猪4月龄进行第二次选留，对少数发育不良，体重小于40kg以及体型外貌差者予以淘汰；于皮特兰猪6月龄进行第三次选留，严格剔除外阴畸形或发育不良、脐疝者。最后根据氟烷基因及其基因型，大力保留HalNHalN基因型的皮特兰猪，择优选留HalNHaln基因型的皮特兰猪，严格剔除HalnHaln基因型的皮特兰猪，同时根据每头皮特兰猪的胴体性能和生长性能指标计算出的SI值，从高到低进行选择120头种猪，公母比例1:5，选种时同时参考其父母产仔性能和同胞生长性能。苴中，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>表2各世代皮特兰猪的Hal基因情况世代总数HalNHalNHalNHalnHalnHalnHalN频率012000120011270191087.5%210512355828.1%34613523918733.5%4249751037150.8%526323132093.9%备注表格中的1、2世代分别为实施例2、3的仔猪数量。从表2可以看出，经过有目的的选种配种，各世代的皮特兰猪的HalNHalN基因型频率呈现上升趋势，至5世代HalNHalN基因型皮特兰猪频率已达到87.83%，而HalN基因频率上升到93.9%。实施例5氟烷基因的检测采用PCR-RFLPs法检测从2003年11月份至2007年8月份止的28批共994头后备猪的氟烷基因及其基因型，结果如表3所示。表3各批次氟烷基因检测结果批检测送检检测HalNHalNHalNHalnHalnHaln次曰期总数总数总数其中总数其中总数其中SS￥$103.11.011631631789844242623626203.11.1424241011569880303.11.1970701082351421251697<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>注送检总数与检测总数不太一致，因送检样本或DNA抽提等原因未能检测，氟烷基因检测结果以及选育依据均以检测总数为准从表3中可以看出，尽管不同检测批次间HalN基因以及HalNHalN基因型出现的频率变化较大，各批次间也不是一世代接一世代的关系，但若以年为单位总体来看，整个群体有一个总体的趋势，那就是随着时间的推移，群体中HalN基因的频率在增加，HalNHalN基因型的频率在增加，而HalNHaln基因型频率相对在下降，经过不断的有目的地选配，最终剔除了HalnHaln基因型。这说明随着选育的深入进行，群体正逐步地淘汰Haln基因，向着HalNHalN基因型群体发展，具体的基因及基因型频率发展趋势可参见表4。表4各批次氟烷基因不同基因型及基因频率<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>40.16670.40000.43330.36670.63330細00.57890.42110.28950.710560.07410.55560.37040.35190.648170細00.57890.42110.28950.710580細00.45830.54170.22920.770890.00000.52170.47830.26090.7391100.35420.41670.22920.56250.4375110.05260.21050.73680.15790.8421120.22390.44780.32840.44780.5522130.21210.60610.18180.51520.4848140.44440.44440.11110.66670.3333150.84210.15790細00.92110.0789160.38460.53850.07690.65380.346217l細00.00000細01.00000.000018l細00扁00.0000l細00細0191.00000.00000細0l細00扁0200.92000.08000.00000.96000.0400210.84210.15790細00.92110.078922l細00.00000細0l細00扁0230.95240扁00.04760.95240.0476240.90480.09520細00.95240.0476250.62500.37500細00.81250.187526l扁00.00000.0000l細00扁0270.66670.33330細00.83330.1667280.83330.16670細00.91670.0833实施例6肥育试验及屠宰测定选取出生日期相同或相近、体重大约在2530kg左右的皮特兰仔猪，按照HalNHalN、HalNHaln、HalnHaln基因型分为3组进行肥育试验时，每组不少于6头，逐个称取试验始重，然后每满1个月称一次个体重，至肥育试验结束。屠宰测定时，选取9095kg左右的试验猪，每组选择3头进行屠宰，左胴测量，右胴分割试验。结果如表5所示。表5肥育屠宰试验结果基因型HalNHalN组HalNHaln组HalnHaln组头数(肥育/屠宰)7/37/37/3生长性状平均日增重(g/d)739.50757.98760.201.871.861.85胴体性状平均背膘厚(cm)1.861.701.44眼月几面积(cm2)52.5056.3556.80胴体瘦肉率(％)72.8971.9576.74肉质性状肉色鲜红淡红苍白肌内脂含量(％)2.111.681.519<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>结论剔除Haln基因的皮特兰猪肉肉质得到明显改善，特别是具HalNHalN基因型的皮特兰猪肉，肉色鲜红，大理石纹明显，有光泽，有弹性，而具HalnHaln基因型的皮特兰猪肉，肉色苍白、松软、渗水，出现典型的PSE肉。具HalNHalN基因型的猪肉的嫩度好于HalnHaln基因型，肌内脂含量亦高于后者，这说明前者肉质明显优于后者。HalNHaln基因型的其各项指标介于HalNHalN和HalNHaln基因型之间，更偏近于HalNHalN基因型。并且本发明的HalNHalN基因型的皮特兰猪的胴体瘦肉率也高达72.89%。权利要求一种皮特兰猪的选育方法，其包括如下步骤A)组建基础选育群体，该群体中至少有一头具有HalN基因的皮特兰猪；B)培育皮特兰公猪和母猪并进行选配产仔，选配措施是配种的每对皮特兰公母猪中至少一头具有HalN基因，提高下一代皮特兰猪群体的HalN基因频率；C)培育仔猪并进行选种，选种措施是检测每一仔猪的Hal基因，选留具有HalN基因的皮特兰猪以及综合选择指数高的具有Haln基因的皮特兰猪作为种猪；D)重复步骤B)和步骤C)5～10次。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤A)的基础选育群体中，具有HalN基因的皮特兰猪，是将具有HalN基因的皮特兰公猪精液导入到皮特兰母猪，然后培养具有HalN基因的仔猪纳入选育群体。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤A)中，组建基础选育群体的首要原则是首先选择HalNHalN基因型的皮特兰猪，其次选择HalNHaln基因型的皮特兰猪，最后选择HalnHaln基因型的皮特兰猪，组建基础选育群体的次要原则是取综合选择指数高的皮特兰猪纳入基础选育群体。4.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤B)中，选配措施是首先选择HalNHalN基因型的皮特兰猪，其次选择HalNHaln基因型的皮特兰猪进行配种，加快提高下一代皮特兰猪群体的HalN基因频率。5.如权利要求4所述的方法，其特征在于步骤B)中，交配模式包括HalNHalNXHalNHalN，HalNHalNXHalNHaln，HalNHalnXHalNHalN，HalNHalnXHalNHaln和HalNHalNXHalnHaln。6.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤C)中，所述选种措施是保留HalNHalN基因型的猪，择优选留HalNHaln基因型的猪，严格剔除HalnHaln基因型的猪。7.如权利要求6所述的方法，其特征在于步骤C)中，所述选种的另一措施是取综合选择指数高的皮特兰猪作为种猪。8.如权利要求1、6或7所述的方法，其特征在于步骤C)中，培育仔猪并进行选种时还进行淘汰制选择，于仔猪28±4日龄时进行第一次选留，淘汰体质虚弱、体型外貌差、发育不良者；于皮特兰猪120±10日龄进行第二次选留，对少数发育不良，体重小于40kg以及体型外貌差者予以淘汰；于皮特兰猪180±10日龄进行第三次选留，严格剔除外阴畸形或发育不良、脐疝者；选种时同时参考其父母产仔性能和同胞生长性能。9.如权利要求1、3或7所述的方法，其特征在于所述综合选择指数<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>其中，P表示某一性状的群体平均数，p表示某一性状的个体表型值，1、2、3、4分别表示达100kg的日龄、饲料转化率、活体背膘厚和眼肌面积四个性状。10.如权利要求1所述的方法，其特征在于采用PCR-RFLPs方法检测皮特兰猪的Hal基因。全文摘要本发明公开了一种皮特兰猪的选育方法，其包括如下步骤A)组建基础选育群体，该群体中至少有一头具有HalN基因的皮特兰猪；B)培育皮特兰公猪和母猪并进行选配产仔，选配措施是配种的每对皮特兰公母猪中至少一头具有HalN基因；C)培育仔猪并进行选种，选种措施是检测每一仔猪的Hal基因，选留具有HalN基因的皮特兰猪以及综合选择指数高的具有Haln基因的皮特兰猪作为种猪；D)重复步骤B)和步骤C)5～10次。利用本发明的方法可以有效地提高皮特兰猪群体的HalN基因频率，降低皮特兰猪群的应激反应和PSE肉的出现机率。文档编号A01K67/02GK101743929SQ200910247308公开日2010年6月23日申请日期2009年12月28日优先权日2009年12月28日发明者谈永松申请人:上海市农业科学院;上海科立特农科(集团)有限公司