专利名称：：一株广布拟盘多毛孢菌株及其应用的利记博彩app
技术领域：
：本发明属于生物技术防治领域，具体涉及一株广布拟盘多毛孢真菌(/^WWo"a0^se啦'"ata(Thuem.)Stey.)的新菌株(GXSTYJ01)和通过培养它制备成菌液的方法以及菌液在松突圆阶防治上的应用。
背景技术：
：已知的拟盘多毛孢真菌(/^W"^)均分离自植物体，或为植物病原真菌，或为植物内生真菌。长期以来人们一直把拟盘多毛孢真菌当作植物病原菌进行研究，直到20世纪90年代才开始有内生拟盘多毛孢的报道。而本发明分离自松突圆蚧僵虫体的广布拟盘多毛孢真菌菌株(GXSTYJ01)应属虫生真菌，关于虫生真菌拟盘多毛孢的研究和应用至今仍无报道。松突圆蚧他肌》eWew'api^sop力j7a7^塔i，又名松梓盾阶，隶属同翅目Homoptera阶总禾斗Cocoidea盾阶科Diaspididae灰圆盾阶亚科Diaspidinae突圆蚧属We肌7^rJew'3。主要危害松属植物，在我国松突圆阶的发生区，目前主要危害马尾松、湿地松和加勒比松。至今，不仅最早发生危害的广东全境的松树受其危害，损失惨重，近年来又在福建、广西、江西等地迅速扩散蔓延，从幼树至二三十年生的大树均可受害，造成大面积的松林枯死，防控形势非常严峻。是我国对内对外的有害生物检疫的害虫。目前,控制松突圆蚧危害的主要措施有综合营林措施和天敌小蜂寄生。各种天敌小蜂在松突圆阶上的寄生率不同，最高可达30%。大面积放养小蜂对控制松突圆蚧的虫口密度有一定的作用，但由于种源有限，繁育成本高，其应用受到严重制约。探索微生物防治技术也取得一些可喜的进展。用寄生在甘蔗粉阶上的寄生曲霉菌对松突圆蚧进行致病力试验，其寄生率为13.9%64.9%。采用板栗红阶上分离的芽枝状枝孢霉(6YaA印or/，c"ob5^or/o7Ves)菌粉对3467头松突圆蚧毒力测定，平均死亡率达38.9%;林间试验效果达20.0%以上，最高达57.7%。3然而，该两种微生物防治技术的研究都未能进入开发应用阶段。上述防控措施，均存在防控效果不理想或防控寄生率低的不足。因此，必须针对松突圆蚧的生物学特点，研制出有效防治和控制松突圆蚧的应用技术。
发明内容本发明的目的在于提供一株广布拟盘多毛孢菌株(GXSTYJ01)以及该菌株的液体培养物制备方法和用途。该菌株的液体培养物制剂能够有效防治和控制松突圆阶。本发明人经过广泛的调查研究，从松突圆蚧典型僵虫体上分离、筛选，获得广布拟盘多毛孢真菌(尸es^/o"a力'S5柳/Z7afa(Thuem.)Stey.)菌株(GXSTYJ01)。基于提供防治松突圆蚧微生物菌株的目的，作了进一步的研究，该菌株能够有效致死松突圆蚧，并可通过制备该菌株的液体培养物来实现。一株松突圆蚧虫生真菌菌株GXSTYJ01，该菌株是从松突圆蚧僵虫体中分离、筛选出来的广布拟盘多毛孢菌株系(学名/^"aJo"a力'ss柳i""a(Thuem.)Stey.),所述菌株含有GXSTYJOlITSrDNA序列SEQIDNO.01，保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，其保藏号CGMCC3191。广布拟盘多毛孢菌株在制备防治松突圆蚧的制剂中的应用。所述广布拟盘多毛孢菌株在制备防治松突圆阶的制剂中的应用，是将所述广布拟盘多毛孢菌株的液体培养物直接喷施于染虫的树冠上或稀释3-5倍后施用或均浆后稀释3-5倍施用。广布拟盘多毛孢菌株的液体培养物在防治湿地松粉阶的制剂中的应用。所述广布拟盘多毛孢菌株的液体培养物的培养方法，采用下列液体培养基中的一种按所述培养条件制备A培养基去皮马玲薯200mg切碎煮30min，取过滤液，蔗糖10g，自来水1000ml;B培养基:麸皮50g,蔗糖10g，K,0.5g，MgS040.2g，自来水1000ml;C培养基花生饼粉50g，蔗糖10g，K跳O.5g，MgS040.2g，自来水1000ml;D培养基:花生饼粉40g，麸皮10g,蔗糖10g，KH2P040.5g，MgS040.2g，自来水1000ml;E培养基:面粉50g，蔗糖10g，K跳0.5g，MgS040.2g，自来水1000ml;培养条件是在需氧条件下在26-3(TC和pH6.5-7.0下进行，培养时间3-5d。根据本发明，广布拟盘多毛孢真菌(尸eWa/o"a^wem/"a^(Thuem.)Stey.)菌株(GXSTYJ01)可以从典型的松突圆蚧僵虫体上分离出来。本发明的广布拟盘多毛孢真菌菌株已经于2009年7月10日在中国普通微生物菌种保藏管理中心保藏，并获得保藏登记号CGMCC3191。根据本发明的菌株，广布拟盘多毛孢菌株(GXSTYJ01)具有以下微生物学特征1.形态学特征-在显微镜下观察在固体培养基中培养的菌株时，菌丝有隔，分枝；分生孢子团黑色，直径75-150um，有的可以达到250um。分生孢子盘暗色，圆盘形或垫形，近表生；分生孢子梗短，简单；分生孢子被四个真隔分为五个细胞，呈椭圆形到纺锤形，渐狭到基部，通常是19-25X6-8um。中间3个细胞深色，呈橄榄绿色，着色平均或者靠近上部的2个细胞稍暗，大约13-17ym;两端突出的细胞透明无色，顶端细胞锥形到圆筒形，基底细胞稍宽。顶生3根鞭毛附属丝，偶有2根，很少有4根，大约8-20um;基部生0-l根附属物，3-7wm。2.培养学特征本发明的菌株是一种需氧菌，在26-28"C显示出最佳的生长能力。当在28'C在以下各种固体培养基中培养96h时，本发明的菌株具有以下特性1)在A培养基中培养时，菌落白色，稍扁平，中间部分微红色，绒状，质地松软，边缘菌丝稀疏整齐，菌落直径4.0cm。背面颜色呈淡黄色且分为几个同心环。2)在B培养基中培养时，菌落白色，稍扁平，中间部分微红色，绒状，质地松软，边缘菌丝稀疏整齐，菌落直径2.7cm。背面颜色呈黄色，有同心环。3)在C培养基中培养时，菌落白色——粉红色，稍凸起，绒状，质地松软，边缘菌丝较密整齐，菌落直径3.8cm。背面颜色呈深黄色，有同心环。4)在D培养基中培养时，菌落白色，稍扁平，中间部分微红色，绒状，质地松软，边缘菌丝较密整齐，菌落直径3.4cm。背面颜色呈黄色，有同心环。5)在E培养基中培养时，菌落白色——粉红色，凸起，绒状，质地松软，菌丝发达而密集整齐，菌落直径4.3cm。以上固体培养基中，A、B、C、D培养基的凝固剂为琼脂20g/L，E培养基的凝固剂为适量面粉。5本发明的突出优点在于1.由于能将菌株的液体培养物直接用于防治松突圆阶，其菌液生产所需设备和设施相对简单，生产工艺大大简化，菌液生产的时间短，显著地降低生产成本。2.使用本菌株的液体培养物防治松突圆蚧，与粉剂相比，可明显增强菌剂的粘附力，且有利于菌体的存活和对蚧虫体的侵染。3.经多次林间防治试验证明，本发明菌株制备的液体制剂能够有效地防治松突圆蚧，与本菌株的粉剂比较，其林区防治平均死虫率可达99.7%，比粉剂的防治死虫率95.7%以上提高4个百分点左右。具体实施例方式以下通过实施例对本发明作进一步详细说明。以下实施例仅是说明性的，本发明并不受这些实施例的限制。实施例l1、制备菌株液体培养物将一支斜面菌种接种到盛有300ml液体C培养基的500ml三角烧瓶中，共接种20瓶。在旋转式震荡摇床上以每分钟180转的速度在28。C条件下培养72小时，即得本菌株液体培养物。2、防治松突圆蚧试验用5倍清水稀释该菌液，充分摇匀后，用粗纱布稍做过滤，将菌液中的粗颗粒物去除。在松突圆蚧重灾成熟林区中设置试验区组，喷雾于马尾松树冠上，让菌液自然感染虫体，并分别用本菌株的粉剂和清水为对照。1月后调査防治结果于表l。表1本菌株液体培养物对松突圆蚧的防治结果<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>实施例21、制备菌株液体培养物将一支斜面菌种接种到盛有300ml液体A培养基的500ml三角烧瓶中，共接种15瓶。在旋转式震荡摇床上以每分钟180转的速度在28'C条件下培养72小时，即得本菌株液体培养物。2、防治松突圆阶试验用5倍清水稀释该菌液，充分摇匀后，分别在三片松突圆蚧重灾中龄林区中设置试验区组，喷雾于马尾松树冠上，让菌液自然感染虫体。1月后调査防治结果于表2。表2本菌株液体培养物对松突圆蚧的防治结果处理-林区:林区三林区平均死亡率平均校正死死亡率校顿亡率死亡率校顿亡率死亡率校正死亡率亡率菌液96.5878.4097.4649.8499.0947.2497.7164.82清水对照18.1847.6251.8539.22实施例31、制备菌株液体培养物将一支斜面菌种接种到盛有300ml液体C培养基的500ml三角烧瓶中，共接种12瓶。在旋转式震荡摇床上以每分钟180转的速度在28X:条件下培养96小时，即得本菌株液体培养物。2、防治松突圆蚧试验用3倍清水稀释该菌液，充分摇匀后，在松突圆蚧重灾幼龄林区中设置试验区组，喷雾于马尾松树冠上，让菌液自然感染虫体。1月后调查防治结果于表3。表3本菌株液体培养物对松突圆阶的防治结果处理重复l重复2重复3平均死平均校正死死亡率舰死亡率死亡率校正死亡率死亡率校IEE亡率亡率亡率菌液清水对照100.0077.6095.6573.2583.0560.6592.9022.470.50〈110〉〈120>〈130><160><170><210>〈211〉〈212><213〉<400>tggaagtaeieittttctaaacgcaccttaccgcggctgccgaataagtcaaaaatgcgatattgcgcccattagcttagtgatctgcgat3tctttagccggctgaacttaSEQUENCELISTING广西大学一株广布拟盘多毛孢菌株及其应用2009071Patentlnversion3.51631DNA广布拟盘多毛孢(Pestalotiadisseminata(Thuem.)Stey.)1Eigtcgtaacaaggtctccgttggtg肌GC3gCgg6lgggatca/ttatagag60tCCC￡l￡lCCC￡ltgtgeiacttaCCElttgttgCctcggcageiagctgctcggt120ctggaacggcctaccctgtagcgccttaccctgg肌cggcctaccctgta180gtgg￡lCt￡LCCaetactcttgttattgtattgtaatctgagcgtcttatttt240aactttcaacaacggatctcttggttctggca^tcgatgaag犯cgcagcg300agtaatgtgeiattgcag犯ttcsgtgEiatcatcgaatctttgaacgcaca360tagtattctagtgggcatgcctgttcgagcgtcatttcaacccttaagcc420ttgggagcctactgcttttactagctgtagctcctgaEiatac肌cggcgg480tcctctgagcgtagt肪eitttttatctcgcttttgactggagttgcagcg540ctaaatcccccaatttttaatggttgeicctcggatcaggtaggaataccc600gigcateitcaataagcggagg￡16318权利要求1.一株松突圆蚧虫生真菌菌株GXSTYJ01(CGMCC3191)，该菌株是从松突圆蚧僵虫体中分离、筛选出来的广布拟盘多毛孢菌株系(学名Pestalotiadisseminata(Thuem.)Stey.)，所述菌株含有GXSTYJ01ITSrDNA序列SEQIDNO.01。2.广布拟盘多毛孢菌株在制备防治松突圆蚧的制剂中的应用。3.根据权利要求2所述广布拟盘多毛孢菌株在制备防治松突圆蚧的制剂中的应用，其特征在于是将所述广布拟盘多毛孢菌株的液体培养物直接喷施于染虫的树冠上或稀释3-5倍后施用或均浆后稀释3-5倍施用。4.广布拟盘多毛孢菌株的液体培养物在防治湿地松粉阶的制剂中的应用。5.所述广布拟盘多毛孢菌株的液体培养物的培养方法，其特征在于，采用下列液体培养基中的一种按所述培养条件制备A培养基去皮马玲薯200mg切碎煮30min，取过滤液，蔗糖10g，自来水1000ml;B培养基:麸皮50g，蔗糖10g，KH2P040.5g，MgS040,2g，自来水1000ml;C培养基花生饼粉50g，蔗糖10g，KH2P040.5g，MgS040.2g，自来水1000ml;D培养基:花生饼粉40g，麸皮10g，蔗糖10g，KH2P040.5g，MgS040.2g，自来水1000ml;E培养基:面粉50g，蔗糖10g，KH2P040.5g，MgS040.2g，自来水1000ml;培养条件是在需氧条件下在26-3(TC和pH6.5-7.0下进行，培养时间3-5d。全文摘要一株松突圆蚧虫生真菌菌株，是一株广布拟盘多毛孢真菌(Pestalotiadisseminata(Thuem.)Stey.)菌株GXSTYJ01(CGMCC3191)，该菌株是分离自松突圆蚧僵虫体内而不是分离自植物体内。通过培养它制备成菌液，能够有效地杀死松突圆蚧各种虫态，可用于开发松突圆蚧生防菌。文档编号A01P7/04GK101608165SQ200910114249公开日2009年12月23日申请日期2009年7月22日优先权日2009年7月22日发明者乔梦吉,吕成群,方丽英,韦继光,黄宝灵申请人:广西大学