专利名称：：一种利用茶枯溶液进行蚯蚓采集的方法
技术领域：
：本发明涉及一种蚯蚓釆集的方法，具体来说涉及一种利用茶枯溶液进行野外蚯蚓采集的方法。技术背景-蚯虫引是陆地生态系统中最为重要的大型土壤动物，对土壤有机质的转化和土壤结构的建立有着十分积极的影响。同时，蚯蚓对土壤环境的反应极为敏感，其群落分布、种类组成及密度多寡可作为一个地区土壤条件状况的重要指示。因此蚯蚓的群落调查在土壤生态系统效应评估中得到了广泛应用。然而，蚯蚓的野外采样方法尚并没有建立起统一、完善的标准，而各种采样方法也都存在着一定的缺点。目前，蚯蚓采样所釆用的方法有物理方法如手挖法(hand—sorting)、电击法、化学驱赶方法如福尔马林(formaldehyde)法、芥末(mustardpowder)法、异硫氰酸丙烯酯(allylisothiocyanate)法及各种家用清洁剂驱赶法等。手挖法是对内栖类(endogeic)蚯蚓有效的采样方法，但手挖法耗时、劳动强度大，在有着岩石、多根等地难以操作；对土壤造成严重破坏，在土壤可持续利用地区不能广泛应用；手挖法对容易逃到土壤深层的大型深栖类(anecic)蚯蚓也难以采样。电击法可以减少对土壤的破坏，但操作费时，采样效率容易受到土壤类型、含水量等外界因素制约。化学驱赶是目前应用最为广泛蚯蚓采样方法。将化学溶液泼洒土样，使蚯蚓逃逸出地表进行收集。此法对洞穴为垂直方向的深栖类蚯蚓采样效率高，但对洞穴为水平方向的内栖类蚯蚓采样效率不是很理想。福尔马林是蚯蚓采样最常用的化学剂，采样效率高且方法容易标准化，但近年来的研究表明福尔马林对土壤生物、地表植有着持久的毒害，因此不应该在生态农场、保护区、或有可能渗入到地下水的土壤区使用。对利用芥末进行蚯蚓采样的研究应用也很多，曾有着替代福尔马林法的建议，但芥末法采样效率不够稳定，且商业上的芥末组分和配比并不清楚，因此也难以标准化。近年来，利用异硫氰酸丙烯酯(AITC)进行蚯蚓采样有一些报道，异硫氰酸丙烯酯是很多十字花科植物中可提取的芥子油苷，有刺激的芥子气味，微溶于水，见光易分解，在土壤中半衰期为80—120h，其采样效率和福尔马林法采样效率相近，但异硫氰酸丙烯酯即使保存在避光的丙酮(acetone)溶液中,也会快速从溶液界面蒸发，其准确剂量难以确定。
发明内容本发明的目的是提供了一种无残留污染、对环境友好、采样效果好、采样效率稳定的蚯3蚓采集方法，即利用茶枯溶液进行蚯蚓采集的方法。茶枯是将油茶(Ca附e〃/"o/e^ra)油茶籽榨油后剩余的茶枯粉(或茶籽饼)。茶枯粉中含有茶皂素(TeaSaponin)、粗纤维、茶多酚、氨基酸、蛋白质、矿物质等，其中茶皂素是一种五环三萜皂苷类化合物，具有一定的抗病菌、杀虫作用。本发明人根据茶枯粉具有一定的抗菌、杀虫作用，通过实验对茶枯溶液浓度进行选择，选取到了一定浓度的茶枯溶液，发现该浓度的茶枯溶液能刺激驱赶土壤中的蚯蚓爬出地面，从而实现了本发明。本发明通过以下技术方案予以实现的本发明所述的利用茶枯溶液进行蚯蚓采集的方法，包括以下步骤.-(a):茶枯溶液的制备将茶枯粉按照质量比l:3加入到水中，加热回流0.5-2h，然后过滤，得到茶枯过滤液，将此茶枯过滤液按照质量比1:5-9加入到水中，配制成茶枯溶液；(b):将茶枯溶液喷洒于土壤样方上，每0.25平方米均匀喷洒5-9升茶枯溶液，收集爬出的蚯顿；本发明优选将茶枯粉按质量比1:3加入到水中，加热回流lh，然后过滤，得到茶枯过滤液，将此茶枯过滤液按照质量比l:8加入到水中，配制成茶枯溶液，将茶枯溶液均匀喷洒于土壤样方上，每0.25平方米喷洒5升茶枯溶液。本发明中将茶枯溶液喷洒于样方上，以不溢出样方为准，具体是指等喷洒的茶枯溶液渗进土里后继续喷洒，使样方中的茶枯溶液不要溢出样方外，边喷洒茶枯溶液边收集爬出的蚯顿，一般等待蚯蚓爬出并同时进行采集的时间为1个小时左右，时间从开始喷洒茶枯溶液的时候开始计算。本发明所述的利用茶枯溶液进行蚯蚓采集的方法，由于釆用了合适浓度的茶枯溶液喷洒于样方上，刺激驱赶蚯虫引爬出地面，只需采集爬出的蚯蚓即可，不但采样效果好，此方法在广东省昆虫研究所所内草丛中，其驱赶采样效率为90%以上，其在鹤山人工林区的样地里面，本方法的驱赶采样效率为79.5%，而0.4%福尔马林在此林区的驱赶采样效率为73.9%，而且由于的茶枯溶液容易降解，无残留污染、对环境友好，对土壤生物、地表植物没有持久的毒害，因此是一种非常安全、环保的蚯蚓采集方法，本方法克服了现有采样方法的一些缺点，如福尔马林采样法的毒性和长期残留等问题。因此本发明特别适于生态农场、保护区、或有可能渗入到地下水的土壤区的蚯蚓采集。具体实施例方式下面结合实施例对本发明做进一步的描述实施例1:2007年5月份，在广东省昆虫研究所所内草丛内进行选样，选用茶枯粉按照质量比1:3的比例加入到水中，加热回流lh，然后过滤，得到茶枯过滤液。按照质量比l:8的比例将茶枯过滤液加入到水中稀释，配制成茶枯溶液，将此茶枯溶液不断喷洒于选好的土壤样方上。共选3个样地，各有6个小样方，共有18个1/4nf的样方，各样地采集面积1.5nf。每个1/4m'的样方喷洒茶枯溶液5000ml，喷洒过程中有蚯蚓爬出，收集爬出的蚯蚓，直到没有蚯蚓爬出，等待蚯蚓爬出时间约1个小时，1小时后，对样方进行手挖，统计未驱赶出蚯蚓数量，计算茶枯溶液的驱赶、采集效率，其结果如表1所示。表l茶枯溶液对蚯蚓的驱赶、采集效率<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>实施例2:2007年5月份，在广东省昆虫研究所所内草丛内进行选样，选用茶枯粉按照质量比l:3的比例加入到水中，加热回流0.5h,然后过滤，得到茶枯过滤液。将茶枯过滤液按照质量比1:5的比例加入到水中稀释，配制成茶枯溶液，将此茶枯溶液不断喷洒于选好的土壤样方上。共选3个样地，各有6个小样方，有18个1/4nf的样方，各样地采集面积1.5m2。每个1/4m2的样方喷洒稀释茶枯溶液7000ml，喷洒过程中有蚯蚓爬出，收集爬出的蚯蚓，直到没有蚯蚓爬出，等待蚯蚓爬出时间约l个小时，l小时后，对样方进行手挖，统计未驱赶出蚯蚓数量，计算茶枯溶液的驱赶、采集效率，其结果如表2所示。表2茶枯溶液对蚯蚓的驱赶、采集效率<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>实施例3:2007年5月份，在广东省昆虫研究所所内草丛内进行选样，选用茶枯粉按照质量比L-3的比例加入到水中，加热回流2h，然后过滤，得到茶枯过滤液。将茶枯过滤液按照质量比1:9的比例加入到水中稀释，配制成茶枯溶液，将茶枯溶液不断喷洒于选好的土壤样方上。共选3个样地，各有6个小样方，有18个1/41112的样方，各样地采集面积1.5m2。每个1/4nf的样方喷洒稀释茶枯溶液9000ml，喷洒过程中有蚯蚓爬出，收集爬出的蚯蚓，直到没有蚯蚓爬出，等待蚯KI爬出时间约I个小时，l小时后，对样方进行手挖，统计未驱赶出蚯蚓数量，计算茶枯溶液的驱赶、采集效率，其结果如表3所示。表3茶枯溶液对蚯蚓的驱赶、采集效率样地采集面积(m"采集时间茶枯溶液驱赶、采集的蚯蚓数量(条)茶枯溶液未采集出、手挖数量(条)总数量(条)采集效率(％)样地l1.52007.5.152091522493.30样地21.52007.5.162311324494.67样地31.52007.5.17128713594.81实施例4:2007年5月份，在广东省昆虫研究所所内草丛内进行选样，选用茶枯粉按照质量比l:3的比例加入到水中，加热回流0.5h，然后过滤，得到茶枯过滤液。将茶枯过滤液按照质量比1:9的比例加入到水中稀释，配制成茶枯溶液，将茶枯溶液不断喷洒于选好的土壤样方上。共选3个样地，各有6个小样方，有18个1/4rtf的样方，各样地采集面积1.5nf。每个1/4nf的样方喷洒稀释茶枯溶液6000ml，喷洒过程中有蚯蚓爬出，收集爬出的蚯蚓，直到没有蚯蚓爬出，等待蚯蚓爬出时间约l个小时，l小时后，对样方进行手挖，统计未驱赶出蚯蚓数量，计算茶枯溶液的驱赶、采集效率，其采集效率达到90%以上。实施例5:2007年5月份，在广东省昆虫研究所所内草丛内进行选样，选用茶枯粉按照质量比l-3的比例加入到水中，加热回流1.5h，然后过滤，得到茶枯过滤液。将茶枯过滤液按照质量比1:5的比例加入到水中稀释，配制成茶枯溶液，将茶枯溶液不断喷洒于选好的土壤样方上。共选3个样地，各有6个小样方，有18个1/4m'的样方，各样地采集面积1.5m2。每个1/4m2的样方约需要喷洒稀释茶枯溶液5500ml，喷洒过程中有蚯蚓爬出，收集爬出的蚯蚓，直到没有蚯蚓爬出，等待蚯蚓爬出时间约1个小时，1小时后，对样方进行手挖，统计未驱赶出蚯蚓数量，计算茶枯溶液的驱赶、采集效率，其采集效率达到90%以上。实施例6:2007年5月份，在广东省昆虫研究所所内草丛内进行选样，选用茶枯粉按照质量比l:3的比例加入到水中，加热回流2h，然后过滤，得到茶枯过滤液。将茶枯过滤液按照质量比l:5的比例加入到水中稀释，配制成茶枯溶液，将茶枯溶液不断喷洒于选好的土壤样方上。共选3个样地，各有6个小样方，有18个1/4012的样方，各样地采集面积1.5m2。每个1/4nf的样方约需要喷洒稀释茶枯溶液9000ml，喷洒过程中有蚯蚓爬出，收集爬出的蚯顿，直到没有蚯蚓爬出，等待蚯蚓爬出时间约1个小时，1小时后，对样方进行手挖，统计未驱赶出蚯虫弓l数量，计算茶枯溶液的驱赶、采集效率，其采集效率达到90%以上。本发明人通过实验发现，回流时间小于0.5小时或回流后的茶枯过滤液加水稀释比例大于l:9，将这样条件下制备的茶枯溶液喷洒于样方上，其采集效率显著降低，许多蚯蚓不能被驱赶出地表，而回流时间大于2h，其采集效率并没有提升，从节约资源和采集效率的角度考虑的话0.5-2h是最佳的，而回流后的茶枯过滤液加水稀释比例小于1:5的话，茶枯溶液过浓使得采集效率比较低，并且过浓的茶枯溶液喷洒样方上的话，造成资源的浪费。实施例7:在广东鹤山丘陵综合试验站林区内，本实施例中的茶枯溶液同实施例1的茶枯溶液，将此茶枯溶液不断喷洒于各林区选好的样方上。每个样方为1/4m2，4个样方为一重复，每林区设置三重复，合计釆集面积3m2,每个1/4r^的样方喷洒5000ml茶枯溶液，共对鹤山中荷木林、马占相思林、马尾松林和桉树林分别进行了蚯蚓采集试验。其实验结果如表4所示。表4茶枯溶液对丘陵山林蚯蚓的采集效率<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>权利要求1.一种利用茶枯溶液进行蚯蚓采集的方法，其特征在于包括以下步骤(a)茶枯溶液的制备将茶枯粉按照质量比1∶3加入到水中，加热回流0.5-2h，然后过滤，得到茶枯过滤液，将此茶枯过滤液按照质量比1∶5-9加入到水中，配制成茶枯溶液；(b)将茶枯溶液喷洒于土壤样方上，每0.25平方米均匀喷洒5-9升茶枯溶液，收集爬出的蚯蚓。2.根据权利要求1所述的利用茶枯溶液进行蚯蚓采集的方法，其特征在于在所述的茶枯溶液的制备中，加热回流时间为lh，将此茶枯过滤液按照质量比l:8加入到水中，配制成茶枯溶液，每0.25平方米均匀喷洒茶枯溶液的量为5升。全文摘要本发明公开了一种利用茶枯溶液进行蚯蚓采集的方法，旨在提供一种无残留污染、对环境友好、采样效果好、采样效率稳定的蚯蚓采集方法。本方法包括以下步骤(a)茶枯溶液的制备将茶枯粉按照质量比1∶3加入到水中，用沸水熬煮0.5-2h，然后过滤，得到茶枯过滤液，将此熬煮好的茶枯过滤液按照质量比1∶5-9加入到水中，配制成茶枯溶液；(b)将茶枯溶液喷洒于土壤样方上，每0.25平方米均匀喷洒5-9升茶枯溶液，收集爬出的蚯蚓。本发明特别适于生态农场、保护区、或有可能渗入到地下水的土壤区的蚯蚓采集。文档编号A01M5/00GK101595863SQ20091004074公开日2009年12月9日申请日期2009年7月1日优先权日2009年7月1日发明者廖崇惠,张卫信,李建雄,龚鹏博申请人:广东省昆虫研究所