专利名称：坛紫菜幼苗的低温冷藏保存方法
技术领域：
本发明涉及一种坛紫菜，尤其是涉及一种水产养殖领域的坛紫菜幼苗的低温冷藏保存方法。
背景技术：
坛紫菜(尸w;7/^ra^/to"e"^s)是我国特有的暖温带性品种，是福建、浙江和广东沿海人 工养殖的重要经济红藻，其产量约占全国紫菜总产量的80%。坛紫菜藻种的低温保存，已有大量的研究，现在对坛紫菜叶状体一般采用先进行阴干处 理，后置于-20 -3(TC冰箱中冷冻保存的方法，但是在进行坛紫菜遗传育种研究时，经常需 要大批量处理每次实验结束后的幼芽或幼苗。由于幼苗比较小且较脆弱，冷冻前的分离和阴 干工作比较麻烦、工作量大。而且随着紫菜细胞工程育苗技术的发展，也经常需要保存大量 坛紫菜幼苗，以用于后续叶状体的酶解育苗。因此能否采用幼苗带水直接冷藏，并达到与叶 状体阴干冷藏相同的效果，已经引起藻类学者的关注。目前，有关紫菜叶状体的鲜活带水冷藏， 尚未见过报道。公告号为CN1565168的发明专利提供一种利用人工诱变、体细胞克隆和单性生殖等选育 坛紫菜良种，通过化学或物理人工诱变法获得坛紫菜的变异细胞，用生物工具酶将变异细胞 单个分离并将其培养成完整叶状体。依据叶状体的主要光合色素和色素蛋白质含量的高低和 它们相互间的比值，游离氨基酸含量高低，生长速度，藻体的厚薄和色泽等指标，筛选出优 良突变体叶状体，并将它们再次酶解获得单离体细胞进行再生培养。将获得的幼小叶状体单 个分离，培养至大叶状体，利用单性生殖获得纯系丝状体。优良品系的纯系丝状体的F1代叶 状体，其优良性状经遗传稳定性分析和综合品质测定后，对优良品系的纯系自由丝状体进行 扩增培养，并移植于贝壳内使之成为贝壳丝状体，随后，进行用贝壳丝状体进行大田采苗和 养殖试验。经大田试验证明为性状稳定的优良品系，以自由丝状体的方式进行长期保存和推 广应用。发明内容本发明的目的是提供一种坛紫菜幼苗的低温冷藏保存方法。 本发明包括以下步骤1) 配制冷藏保护剂；2) 将冷藏保护剂分装于冻存管中；3) 收集坛紫菜幼苗；4) 将收集到的坛紫菜幼苗置于装有冷藏保护剂的冻存管中；5) 将装有冷藏保护剂的冻存管冷藏。所配制的冷藏保护剂最好采用盐度为25%。的消毒海水配制，按体积百分比，甘油为10%， 二甲基亚砜(DMSO)5X，葡萄糖15%，余为消毒海水。冻存管最好为50ml冻存管。每个50ml 冻存管中最好装冷藏保护剂30ml。坛紫菜幼苗最好为l 3cm的鲜活坛紫菜幼苗。所述冷藏最 好将装有冷藏保护剂的冻存管密封置于-20 -25'C冰箱中保存。收集到的坛紫菜幼苗直接置于装有冷藏保护剂的冻存管中即可，无需阴干处理。当需要复苏时，将装有冷藏保护剂的冻存管置于水浴中解冻，即可取出。取出冻存管中 的坛紫菜幼苗，经消毒海水洗涤后，即可进行恢复培养。水浴的温度最好为2(TC，水浴中解 冻的时间可为15min，消毒海水洗涤的次数最好2 4次。复苏后的坛紫菜幼苗，经恢复培养， 低温冷藏180d的鲜活坛紫菜幼苗，存活率仍然可达95%以上。由于本发明使用冷藏保护剂对坛紫菜幼苗进行鲜活保存，因此避免了常规低温保存时，需对叶状体进行分离、阴干处理等工作，大大节省了工作量，也提高了坛紫菜叶状体低温冷 藏的存活率。
具体实施方式
假设在坛紫菜遗传育种时，通过坛紫菜壳孢子的放散、萌发获得了大量坛紫菜幼苗，在 无法及时对各株坛紫菜幼苗进行单株培养，以考察各株坛紫菜的经济性状时，即可采用该方 法对坛紫菜鲜活幼苗进行低温冷藏。具体步骤如下1) 用盐度为25%。的消毒海水配制冷藏保护剂，按体积百分比，含10%甘油，5% DMSO， 15%的葡萄糖，70%消毒海水；2) 将配制好的冷藏保护剂取30ml，分装于50ml冻存管中；3) 将l 3cm的坛紫菜鲜活幼苗直接置于装有冷藏保护剂的冻存管中；4) 将冻存管密封后，置于-20 -25'C冰箱中保存。存储一段时间后，需使用这些幼苗时，即可将冻存管从冰箱中取出，进行复苏培养将 冻存管从冰箱中取出，直接置于20'C水浴中解冻；15min后，将冻存管从水浴中取出，经消 毒海水洗涤3次，即可置于培养瓶中进行单株培养。保存时间在180d以内的坛紫菜幼苗，存活 率可达95%以上。
权利要求
1.坛紫菜幼苗的低温冷藏保存方法，其特征在于包括以下步骤1)配制冷藏保护剂；2)将冷藏保护剂分装于冻存管中；3)收集坛紫菜幼苗；4)将收集到的坛紫菜幼苗置于装有冷藏保护剂的冻存管中；5)将装有冷藏保护剂的冻存管冷藏。
2. 如权利要求l所述的坛紫菜幼苗的低温冷藏保存方法，其特征在于所述的冷藏保护剂 采用盐度为2596。的消毒海水配制，按体积百分比，甘油为10%， 二甲基亚砜5%，葡萄糖15 %，余为消毒海水。
3. 如权利要求l所述的坛紫菜幼苗的低温冷藏保存方法，其特征在于冻存管为50ml冻存管。
4. 如权利要求3所述的坛紫菜幼苗的低温冷藏保存方法，其特征在于每个50ml冻存管中 装冷藏保护剂30ml。
5. 如权利要求l所述的坛紫菜幼苗的低温冷藏保存方法，其特征在于坛紫菜幼苗为1 3cm的鲜活坛紫菜幼苗。
6. 如权利要求l所述的坛紫菜幼苗的低温冷藏保存方法，其特征在于所述冷藏是将装有 冷藏保护剂的冻存管密封置于-20 -25'C冰箱中保存。
全文摘要
坛紫菜幼苗的低温冷藏保存方法，涉及一种坛紫菜，尤其是涉及一种水产养殖领域的坛紫菜幼苗的低温冷藏保存方法。提供一种坛紫菜幼苗的低温冷藏保存方法。配制冷藏保护剂；将冷藏保护剂分装于冻存管中；收集坛紫菜幼苗；将收集到的坛紫菜幼苗置于装有冷藏保护剂的冻存管中；将装有冷藏保护剂的冻存管冷藏。当需要复苏时，将装有冷藏保护剂的冻存管置于水浴中解冻，即可取出。复苏后的坛紫菜幼苗，经恢复培养，低温冷藏180d的鲜活坛紫菜幼苗，存活率仍然可达95％以上。由于使用冷藏保护剂对坛紫菜幼苗进行鲜活保存，因此避免了常规低温保存时，需对叶状体进行分离、阴干处理等工作，大大节省了工作量，也提高了坛紫菜叶状体低温冷藏的存活率。
文档编号A01N3/00GK101326905SQ20081007152
公开日2008年12月24日 申请日期2008年8月1日 优先权日2008年8月1日
发明者燕 徐, 纪德华, 谢潮添, 陈昌生 申请人:集美大学