专利名称：一种伞滑刃属线虫的培养与收集方法及其装置的利记博彩app
技术领域：
本发明涉及一种伞滑刃属线虫的培养与收集方法及其装置，属线虫培养技 术领域。
背景技术：
'植物病原线虫的培养是植物病理学教学与科研中重'要的实验环节。针对伞
滑刃属中松材线虫和拟松材线虫，最常用的培养方法是PDA培养基灰葡萄孢菌 培养法，通常在玻璃培养皿中进行。具体方法是先将灰葡萄孢菌接种在无菌的 固体PDA培养基上，培养灰葡萄孢长满培养皿时，接种所需要的线虫，培养约 两周后当可见大量灰葡萄孢菌丝被线虫取食时，即可用无菌水冲洗培养基表面 回收线虫，该方法存在的主要缺点是1.回收到的线虫悬浮液中混有大量的灰 葡萄孢菌丝和孢子；2.获得的线虫悬浮液中死虫占了相当大的比例；3.获得虫 量相对较少。此外也有学者提出用三角瓶装麦粒培养基进行培养，此方法获得 虫量较大，但死虫数量较多，菌丝碎片和孢子混杂的缺点依然存在。因此在后 续实M中，不得不从大量的线虫悬浮液中逐条挑取以获得干净的健康活虫，从 而加大实验难度，延长实验时间，费工费时。因此，线i的培养及实验用虫的 选取成为研究植物病原线虫的一个重要难题。
经文献检索，未见与本发明相同的公开报道。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术之不足，提供一种伞滑刃属线虫的培养与 收集方法及其装置。
本发明的伞滑刃属线虫的培养与收集方法由常规的培养与收集方法改进
而成，具体步骤如下
a. 选用密封性较好的组织培养瓶；
b. 选用通用2毫升离心管，将离心管的盖(3)和离心管(4)用小刀分开, 切除多余的部分，保证其切口平滑，用半固体胶将离心管(4)与离心管盖(3) 的接口粘合至无缝隙，风干、消毒，灭菌备用；
c/在组织培养瓶盖(2)上选取对称的数个位点；
d. 测量离心管盖(3)的直径，选用小于离心管盖G)直径的打孔器在组 织培养瓶盖(2)上对称位点打孔；
e. 将离心管盖(3)镶嵌在织培养瓶盖(2)上的孔中；
f. 在组织培养瓶体(1).中装入麦粒培养基至四分之三处，盖上常规组织 培养瓶盖(2)，常规灭菌接种灰葡萄孢和所需培养的虫体；
g. 当所培养线虫开始取食灰葡萄孢时，在超净工作台上用权利要求2所述 的盖子消毒后替换常规组织培养瓶盖(2)，放入25"C培养箱中培养；
h. 培养两到三天后，松材线虫爬上组织培养瓶瓶壁并一部分进入离心管
(4)中；
'i.将已收集到松材线虫的离心管管体拔下，用于实验研究；同时将灭菌备 用的未使用过离心管管体镶嵌在织培养瓶盖(2)上已打好的孔中，继续收集；
j.经过多次收集，在后期虫量少的情况下，向组织培养瓶中喷入雾状无菌
水促进收集；
k.当实验研究需要纯活虫时，提前12小时将已收集到松材线虫的离心管 管体拔下，同时将灭菌备用的新离心管管体镶嵌在织培养瓶盖(2)上的孔中， 次日离心管管体中收集的线虫即为活虫。 '
本发明的伞滑刃属线虫培养与收集方法的装置，由组织培养瓶体(1)和 组织堉养瓶盖(2)组成，其中组织培养瓶盖(2)上开有孔，孔中镶嵌有由 离心管盖(3)和离心管U)'构成的离心管管体。本实用新型的离心管U) 的数量按需要确定；组织培养瓶选用通用的任何形状的透明瓶。
本发明与现有技术相比，具有结构简单，线虫培养及实验用虫选取的操作
程序简便，实验难度降低，实验时间短，实验用虫的纯度及实验结果的准确性 提高等优点。可广泛用于伞清刃属线虫的培养及高纯度虫群的收集。
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附图是本发明装置的结构示意图。
具体实施例方式
'本发明方法采用的装置，由组织培养瓶体(1)和组^U咅养瓶盖(2)组成， 其中组织培养瓶盖(2)上开有孔，孔中镶嵌有由离心管盖(3)和离心管(4)
构成的离心管管体。本实用新型的离心管(5)的数量按需要确定；组织培养
瓶选用通用的任何形状的透明瓶。
本发明的伞滑刃属线虫的培养与收集方法由常规的培养与收集方法改进
而成，具体步骤如下
a. 选用密封性较好的组织培养瓶；
b. 选用通用2毫升离心管，将离心管的盖(3)和离心管(4)用小刀分开， 切除多余的部分，保证其切口平滑，用半固体胶将离心管(4)与离心管盖(3) 的接口粘合至无缝隙，风干、'消毒，灭菌备用；
c. 在组织培养瓶盖(2)上选取对称的3个位点；
d. 测量离心管盖(3)的直径，选用小于离心管盖(3)直径的打孔器在组 织培养瓶盖(2)上对称位点打孔；
e. 将离心管盖(3)镶嵌在织培养瓶盖(2)上的孔中；
f. 在组织培养瓶体(1)中装入麦粒培养基至四分之三处，盖上常规组织
培养瓶盖(2)，常规灭菌接种灰葡萄孢和所需培养的松材线虫；
g. 当所培养松材线虫开始取食灰葡萄孢时，在超净工作台上用权利要求2 所述的盖子消毒后替换常规组织培养瓶盖(2)，放入25"C培养箱中培养；
.h.培养两到三天后，松材线虫爬上组织培养瓶瓶寧并一部分进入离心管 (4)中；
i.将已收集到松材线虫的离心管管体拔下，用于实验研究；同时将灭菌备 用的未使用过离心管管体镶嵌在织培养瓶盖(2)上已打好的孔中，再次收集;
j.经过多次收集，在后期虫量少的情况下，向组织培养瓶中喷入雾状无菌 水促进收集；
k.当实验研究需要纯活虫时，提前12小时将已收集到松材线虫的离心管 管体拔下，同时将灭菌备用的新离心管管体镶嵌在织培养瓶盖(2)上的孔中， 次曰离心管管体中收集的线虫即为活虫。
权利要求
1、一种伞滑刃属线虫的培养与收集方法，由常规的培养与收集方法改进而成，其特征在于a.当所培养线虫开始取食灰葡萄孢时，在超净工作台上用权利要求2所述的盖子消毒后替换常规组织培养瓶盖(2)，放入25℃培养箱中培养；b.培养两到三天后，线虫爬上组织培养瓶瓶壁并一部分进入离心管(4)中；c.将已收集到线虫的离心管管体拔下，用于实验研究；同时将灭菌备用的未使用过离心管管体镶嵌在织培养瓶盖(2)上已打好的孔中，继续收集；d.经过多次收集，在后期虫量少的情况下，向组织培养瓶中喷入雾状无菌水促进收集；e.当实验研究需要纯活虫时，提前12小时将已收集到线虫的离心管管体拔下，同时将灭菌备用的新离心管管体镶嵌在织培养瓶盖(2)上的孔中，次日离心管管体中收集的线虫即为活虫。
全文摘要
本发明涉及一种伞滑刃属线虫的培养与收集方法及其装置，属线虫培养技术领域。装置是由组织培养瓶体(1)、组织培养瓶盖(2)、镶嵌在组织培养瓶盖(2)上由离心管盖(3)和离心管(4)构成的离心管管体组成。方法由常规的培养与收集方法改进而成。本发明与现有技术相比，具有结构简单，简化了常规线虫培养及实验用虫选取复杂的操作程序，实验难度降低，节省了实验时间，实验用虫的纯度及实验结果的准确性提高等优点。可广泛用于伞滑刃属线虫的培养及高纯度虫群的收集。
文档编号A01K67/033GK101347110SQ200810058860
公开日2009年1月21日 申请日期2008年8月28日 优先权日2008年8月28日
发明者喻盛甫, 姚茹瑜, 李维蛟, 扬 王, 陈志星 申请人:云南农业大学