专利名称：马蔺组培快繁体系构建技术的利记博彩app
技术领域：
本发明涉及绿色地被植物领域，尤其是种苗快繁的生物技术技术背景马蔺[Iris lacteal pall.var chinensis(Fisch.)]是鸢尾科鸢尾属多年生草本宿根植物，具有很强的抗旱，抗寒，耐盐碱，抗病虫能力，近年来逐渐被用作水保护坡、园林绿化观赏地被建设的优良材料。然而，由于存在马蔺种子硬实率高和常温培养条件下的发芽率与发芽势低的繁殖局限性，以及异型杂交使种子繁殖不能保证品种基因型一致的缺点，因此，非常迫切去寻求一套马蔺快速繁殖的技术体系，不仅可以加快马蔺繁殖速度，节约成本，不受季节限制成批上市，为马蔺种苗产业化提供技术保障，而且为城市园林绿化观赏地被建设和道路、河堤护坡等及时大量提供种苗奠定基础。这项技术是业内人士重视且呼吁迫切解决的重要技术问题。
发明内容
本发明的目的是提供一种快速无性繁殖，成活率高，不受季节影响，大幅降低建植成本，在水保护坡和城市观赏地被建设中易于推广的马蔺组培快繁体系构建技术，包括整个过程中各环节的最佳培养基和操作过程。
实现发明的目的的技术方案如下马蔺组培快繁体系构建技术，包括外植体制备，愈伤组织诱导，绿苗分化，继代增殖，生根培养和试管苗移栽六个阶段的构建技术。
(1)外植体制备时将马蔺种子去除坚硬种皮后，经2.33％次氯酸钠溶液浸泡灭菌，再用无菌水清洗，(2)愈伤组织诱导，将外植体接种到愈伤组织诱导培养基上，在无光条件下，室温24-26℃进行愈伤诱导，
(3)绿苗分化，将愈伤组织转移到分化芽培养基上，在光照强度为1000LX下进行24hr/d光照，24-26℃进行分化芽培养，(4)继代增殖，将分化芽丛转移到增殖培养基上，在光照强度为1000LX下进行24hr/d光照，在室温24-26℃进行继代增殖，(5)生根培养，将经过继代增殖培养的分化芽转移到生根培养基上，在光照强度为1000LX下进行24hr/d光照，24-26℃进行生根培养，(6)试管苗移栽，当根密度平均达到3.33，根长6-10cm，平均株高9-10cm时，即可野外直接移栽，将组培苗移栽入土，保持土壤温润，并搭蓬保护，半月后拆蓬。
在整个繁殖过程中所涉及到的各种培养基制备方法如下愈伤组织诱导培养基是在MS培养基中加入6g/l琼脂粉，60g/l蔗糖，和植物激素，用INNaOH溶液调节PH至6.0再经高压蒸气消毒灭菌即可使用。MS培养基中硝酸铵在正常情况下，激素配方为2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)4mg/l+6-苄基腺嘌呤(BA)2-5mg/l，或2，4-D 2mg/l+6糠基腺嘌呤(KT)1.5mg/l；如MS培养基中硝酸铵含量加倍时，植物激素配方为2，4-D 2-4mg/l+BA1-2mg/l，或2，4-D 4mg/l+KT 0.5-1.5mg/l。
分化芽培养基是在MS培养基中加入6g/l琼脂粉，30g/l蔗糖和植物激素，再用INNaOH溶液调节PH值至6.0，再经过高压蒸汽消毒灭菌。
当愈伤组织诱导培养基中生长素/分裂素(2，4-DKT)为1∶0.75时，植物激素配方为BA4mg/l+奈乙酸(NAA)0.5mg/l，或BA 2mg/l+NAA 0.5mg/l。
继代增殖培养基采用MS培养基本成分，再加入6g/l琼脂粉，30g/l蔗糖，及植物激素，再用INNaOH溶液调节PH至6.0，再经过高压蒸汽灭菌消毒后作为继代增殖培养基。如愈伤组织分化芽培养基中的植物激素组分为BA4mg/l+(NAA)0.5mg/l的，则继代增殖培养基中的植物激素采用BA2-4mg/l+NAA0-0.5mg/l；或采用BA2-4mg/l，再转入BA0.5-1mg/l+NAA 0-0.5mg/l；如愈伤组织分化芽培养基中的植物激素组分为BA2mg/l+NAA0.5mg/l的，则继代增殖培养基中的植物激素采用BA2mg/l+NAA 0.1-0.2mg/l。
生根培养基是在1/2MS培养基中加入6g/l琼脂粉，30g/l蔗糖，用INNaOH溶液调节PH至6.0，再经高压蒸气消毒灭菌。
本发明具有下列特点(1)提前出苗，节省时间，种子经愈伤组织诱导后进行分化芽培养，经过1-2个月愈伤组织即可分化出芽丛，缩短了出芽丛时间。
(2)成活率高用传统的种子繁殖方法，成活率低，一般＜50％，采用本发明后成活率提高到95％以上。
(3)不受季节的影响，适于全年繁殖，可大批量供应种苗。
(4)在试管苗移栽时，不需炼苗，采用直接出瓶移栽的方法，将组培苗移栽入土，简化了程序，降低了成本。
具体实施例方式
现通过下述优选的实施方式对本发明作进一步的说明。
(1)选取成熟饱满的马蔺种子，去除硬种皮后，用纱布包好，经2.33％次氯酸钠溶液浸泡，搅动，消毒灭菌25分钟，在超净工作台上用无菌水清洗7次，每次2-3分钟。
(2)采用MS培养基基本成分，加入6g/l琼脂粉，60g/l蔗糖，和植物激素，用IN氢氧化钠溶液调节PH至6.0，置入培养皿或三角瓶中高压蒸气灭菌消毒后，作为愈伤组织诱导培养基。将外植体接种到培养基上，培养条件控制在黑暗无光，室温26℃下，诱导1个月左右即可出现良好的愈伤组织。
(3)将愈伤组织转移到激素含量分别是BA 4mg/l+NAA(奈乙酸)0.5mg/l或BA 2mg/l+NAA 0.5mg/l的分化芽培养基上，培养条件控制在24hr/d光照，室温26℃下，光照强度1000lx下，经过1-2个月愈伤组织即可分化出芽丛。
(4)将经含有植物激素为BA 4mg/l+NAA(奈乙酸)0.5mg/l的培养基中愈伤分化芽培养的转入含有BA 2-4mg/l+NAA 0-0.5mg/l；植物激素的继代增殖培养基中培养25天，在光照强度为1000LX下25hr/d光照，温度保持在24-26℃，得到良好的继代增殖。
(5)将经过继代增殖的分化芽丛转移到绿苗生根培养基上，以光照强度为1000LX条件下进行24hr/d光照，温度保持在24℃，经过一个月的再生苗生根。
(6)当再生苗生根的根密度平均达到3.33，根长6-10cm，平均株高9-10cm时，叶片生长茂密、健康，达到野外直接移栽标准。采用不需炼苗直接出瓶移栽的方法，将组培苗移栽入土，沙性土壤为佳，移栽后早春需搭建塑料大蓬或夏季需搭建遮阳蓬以模拟密闭环境，半月后拆蓬。期间要浇水保持土壤湿润。期成活率达95％以上。
权利要求
1.马蔺组培快繁体系构建技术，包括外植体制备，愈伤组织诱导，绿苗分化，继代增殖，生根培养和试管移栽，其特征为(1)外植体制备时将马蔺种子去除坚硬种皮后，经2.33％次氯酸钠溶液浸泡灭菌，再用无菌水清洗，(2)愈伤组织诱导，将外植体接种到愈伤组织诱导培养基上，在无光条件下，室温24-26℃进行愈伤诱导，(3)绿苗分化，将愈伤组织转移到分化芽培养基上，在光照强度为1000LX下进行24hr/d光照，24-26℃进行分化芽培养，(4)继代增殖，将分化芽丛转移到增殖培养茎上，在光照强度为1000LX下进行24hr/d光照，在室温24-26℃进行继代增殖，(5)生根培养，将经过继代增殖培养的分化芽转移到生根培养基上，在光照强度为1000LX下进行24hr/d光照，24-26℃进行生根培养，(6)试管苗移栽，当根密度平均达到3.33，根长6-10cm，平均株高9-10cm时，即可野外直接移栽，将组培苗移栽入土，保持土壤温润，并搭蓬保护，半月后拆蓬。
2.根据权利要求1所述的马蔺组培快繁体系构建技术，其特点为愈伤组织诱导培养基是在MS培养基中加入6g/l琼脂粉，60g/l蔗糖，和植物激素，用INNaOH溶液调节PH至6.0再经高压蒸气消毒灭菌。
3.根据权利要求2所述的马蔺组培快繁体系构建技术，其特征为当MS培养基中硝酸铵是正常情况下激素配方如下2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)4mg/l+6-苄基腺嘌呤(BA)，或2，4-D2mg/l+6糠基腺嘌呤(KT)1.5mg/l。
4.根据权利要求书2所述马蔺组培快繁体系构建技术，其特征为当MS培养基中硝酸铵含量加倍，植物激素配方如下2，4-D2-4mg/l+BA1-2mg/l，或2，4-D4mg/l+KT 0.5-1.5mg/l。
5.根据权利要求1所述马蔺组培快繁体系构建技术，其特征为分化芽培养基是在MS培养基中加入6g/l琼脂粉，30g/l蔗糖和植物激素，再用INNaOH溶液调节PH值至6.0，再经过高压蒸汽消毒灭菌。
6.根据权利要求5所述的马蔺组培快繁体系构建技术，其特征为当愈伤组织诱导培养基中生长素/分裂素(2，4-DKT)为1:0.75时，植物激素配方如下BA4mg/l+奈乙酸(NAA)0.5mg/l，或BA 2mg/l+NAA 0.5MG/l。
7.根据权利要求1所述的马蔺组培快繁体系构建技术，其特征为继代增殖培养基采用MS培养基基本成分，再加入6g/l琼脂粉，30g/l蔗糖，及植物激素，再用INNaOH溶液调节PH至6.0，再经过高压蒸汽消毒灭菌，
8.根据权利要求7所述马蔺组培快繁体系构建技术，其特征为继代增殖培养基中植物激素配方为BA 2-4mg/l+NAA 0-0.5mg/l或先经含有植物激素BA2-4mg/l的培养基，再转入含有植物激素BA0.5-1mg/l+NAA-0.5mg/l的培养基。
9.根据权利要求1所述马蔺组培快繁体系构建技术，其特征为生根培养基是在1/2MS培养基中加入6g/l琼脂粉，30g/l蔗糖，用INNaOH溶液调节PH至6.0，再经高压蒸气灭菌消毒。
全文摘要
本发明为马蔺组培快繁体系构建技术，涉及绿色地被植物领域，作为优良的绿化草种的马蔺，存在着硬实率高和发芽率、发芽势低的繁殖局限性，为了克服这些缺点，本发明研究出了在外植体制备，愈伤组织诱导，绿苗分化，继代增殖生根培养，和试管苗移栽过程中各环节的操作规程和培养基采用了在MS培养基的基本成分中添加了琼脂粉，蔗糖和多个过程中的专用植物激素，调节pH至6.0，本发明具有成活率高，达到95％以上，不受季节影响，可大批供应种苗，提前出芽丛节省时间，和简化程序，降低成本的特点。
文档编号A01H4/00GK1545862SQ20031011847
公开日2004年11月17日 申请日期2003年12月18日 优先权日2003年12月18日
发明者孟林, 赵茂林, 高洪文, 肖阔, 孟 林 申请人:北京草业与环境研究发展中心, 北京农业生物技术研究中心